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为了便于对所检测样本进行比较,在real-time q-pcr反应的指数期,首先需设定一定荧光信号的域值,一般这个域值threshold是以pcr反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 baseline,荧光域值的缺省设置是3~15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真正的信号,它可用于定义 样本的域值循环数ct。
每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。研究表明,每个模板的ct值与该模板的起始拷贝数的 对数存在线---,起始拷贝数越多,ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,因此只要获得未知样品的ct值,即可从标准曲线上计算出该样 品的起始拷贝数。
目前,采用荧光定量pcr检测技术可以对解脲支原体、人类瘤---、单纯---、肝的---、---、eb---和巨细胞---等病原体进行定量测定。与传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。如:菌基因诊断的意义主要表现在:a.区分tb;b.检测tb耐药基因;c.提高tb的阳性检出率。
到目前为止,人们对遗传性物质改变引起的遗传性---还无法治,只能通过产前监测,减少病婴出生,以防止各类遗传性---的发生,如为减少x连锁遗传病患儿的出生,从孕妇的外周血中分离胎儿dna,用实时荧光定量pcr检测其y性别决定区基因是一种无创伤性的方法,易为孕妇所接受。
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