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液相色谱在使用过程中四大关键因素

1.液相色谱仪本身：对于仪器本身一般不会有问题，-是刚买回来的新仪器。对于仪器本身重要的就是仪器的校验，刚买回来的仪器一般都是由卖家先对仪器做系统的确认工作包括iq、pq、oq，确认顺利通过后，再请或-仪器检定局的来校验，检定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年会对仪器进行一次的内部校验，目的就是为了-仪器的正常可运行状态。

2.色谱条件：色谱条件一般包括流动相、色谱柱、检测波长、流速及进样量。

流动相就涉及到配制流动相所用到的水和试剂试液，水一般要求用超纯水或其他水的电阻率不大于18.2兆欧级别，试剂试液要求用色谱级别的，原因为防止水和试剂试液中的杂质对色谱结果的干扰。

3.操作人员：首先，作为液相操作人员，一定要认真学习夜想的说明书，掌握液相硬件和软件的操作，掌握日常的维护保养，掌握基础故障的排除和维修。

4.液相安装环境：液相色谱仪应尽量安装于水平、远离振动、电磁干扰的屋内的台面上，有条件的话尽量将液相数据处理系统分隔开，一个是防止色谱基线噪音偏大，基线不稳等，一个是为减少对人体的危害。

色谱分离基本原理 

在色谱法中存在两相，一相是固定不动的，我们把它叫做固定相；另一相则不断流过固定相，我们把它叫做流动相。     液相色谱的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的。使用外力使含有样品的流动相气体、液体通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。     由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，液相色谱使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。

制备液相色谱

色谱法是根据混合物中各组分的化学特性对其进行分离的一种分离方法。

分析色谱强调的是各组分的完全分离以达到化合物确认和定量目的。而制备型(prep)色谱或纯化色谱则是指利用色谱方法分离出一定量达到足够纯度的化合物用于后续实验或处理的色谱方法。

科学家首先要开发色谱方法，将目标化合物从原料、副反应或其它杂质中成功分离出来。从科研到工业企业纯化色谱应用非常广泛。尽管应用领域各不相同，用户的一般要求却非常相似，他们都希望分离出的终产物纯度能达到相当纯的化合物，实现科研或生产的需要。

采用液相色谱进行纯化lc纯化系统的配置与一般液相色谱系统基本相同，但增加了馏分收集器。样品混合物被进样至色谱柱，色谱柱根据组分特有的化学或物理性质对其进行分离。检出组分时，系统会将其输送至废液，或者进行收集用于后续实验。洗脱液收集操作既可由分析人员在组分洗脱时通过简单的手动方式完成，也可以全自动进行，在自动收集操作中，检测器信号会触发馏分收集器将液流输送至收集容器中。输送至收集容器的馏分纯度取决于分离过程中化合物与其它邻近洗脱杂质的分离度。制备色谱的-竞争力总结起来就是“多，快，好，省”。

液相色谱仪

20世纪初在-的波兰植物化学家茨维特twseet首先将植物提取物放入装有碳酸钙的玻璃管中，植物提取液由于在碳酸钙中的流速不同分布不同，因此在玻璃管中呈现出不同的颜色，这样就可以对各种不同的植物提取液进行有效的成分分离。

1941年，马丁与辛格用一根装满硅胶微粒的色谱柱，完成了-化-的分离，开启了液色谱技术，因此获得诺贝尔化学奖。1949年，马丁建立了色谱保留值与热力学常数之间的关系，奠定了物化色谱的基础；1952年，马丁与辛格又创立了气液色谱法，分离了脂肪酸与脂肪胺。1966年之前科学家所做的努力，为传统-液相色谱奠定了基础。

而液相色谱仪的-则是由斯坦因与莫尔于1958年设计的-酸分析仪，这种仪器能够分蛋白质水解的产物。首台商用lc则是由沃特斯公司制造。

1971年之后，液相色谱技术得到了飞速的发展，hplc的分析体制也逐步完善。到了二十世纪八十年代中期，液相色谱技术已经非常非常成熟，激动人心的新发展日趋减少，人们开始转向相关领域发展，如超临界色谱、毛管电泳色谱、制备色谱等。