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农杆1菌转化法在植物遗传转化中的应用:过去认为受农
进入20世纪90年代后,农杆1菌转化法在水稻、玉米等重要的农作物上取得突破性进展。首先是1991年gould和shen等利用农bacillus转化玉米茎尖分生组织获得转0基因植株。1998年lupotto也实现了农bacillus转化玉米的成功,southern杂交结果显示外源基因能够稳定遗传到下一代。
腺-表达
腺-系统是很受欢迎的可以在任何哺乳动物细胞中有效瞬时表达的基因递送平台。对于难转染的细胞,如原代或非分裂细胞,采用-递送外源基因的方式是非常有效的选择。钟鼎生物采用293a腺-包装细胞系含有腺-包装所必需的e1基因序列,是专为生产腺-和进行滴度测定而建立的,用于高滴度的copy缺陷型e1和e3缺失腺-的生产,以进行外源基因的表达。腺-感1染几乎所有的细胞类型,除了一些抗腺-感1染的淋巴1瘤细胞。腺-是研究原代非增殖细胞基因表达的zui佳系统,它可以使转化细胞和原代细胞中得到的结果直接进行对比;不整合到染色体中,无插入致突变性。能有效进行增殖,滴度高:腺-系统可产生108 pfu/ml原液,浓缩后可达1010-1011 vp/ml,这一特点使它非常适用于基因cure。
腺-的研究简史
腺-对啮齿类动物有-能力,或能转化体外培养的啮齿类动物细胞。使细胞转化只需要腺-基因组的一部分,这些基因位于基因组的左端,约占整个基因组的7%~10%。尽管腺-分布很广,但对人体不出现-性。人体细胞是一类允许细胞(permissive cell),即这类细胞允许感1染入1侵的-在细胞内copy增殖,zui后细胞裂解died而释放出大量1子代-。在体外培养的多种人体肿1瘤细胞中均未查出腺-颗粒,但在人的1号染色体上有adl2的整合位点,这意味着人体细胞对于腺-也可能是非允许细胞,即这类细胞在-感1染后,-不能在细胞内copy增殖,但可整合在受感1染细胞的基因组内。这些细胞被-转化,表型发生改变,且可在体外期地培养传代。
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