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发布者：武汉思特进科技发展有限公司时间：2021-11-11

多彩色荧光原位杂交技术多彩色荧光原位杂交(multicolor fluorescence in situ hybridization，mfish)是在荧光原位杂交技术的基础上发展起来的一种新技术，它用几种不同颜色的荧光素单独或混合标记的探针进行原位杂交，能同时检测多个靶位，各靶位在荧光显微镜下和照片上的颜色不同，呈现多种色彩，因而被称为多彩色荧光原位杂交。它克服了fish技术的局限，能同时检测多个基因，在检测遗传物质的突变和染色体上基因定位等方面得到了广泛的应用(杨明杰等1998)。

原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行-特-检测，与免6疫组化技术的结合应用，能将dna、mrna和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。1969年pardue和gall将放9射性标记的探针直接应用于纯化-的杂交，此后得益于分子克6隆技术的发展，及不同探针标记系统和检测系统的应用，大大增加了原位杂交检测的应用灵活性和检测灵敏度。

杂交流程

杂交液的成分主要影响了-杂交的复性动力学和热稳定性。杂交液的基础成分为：denhardts溶液ficoll，bsa，pvp，异源-如鲱精3子dna/trna/竞争dna，磷酸钠，edta，sds，盐离子，-胺和-葡聚糖，以及杂交探针。不同的应用中进行杂交温度、ph、盐离子、-胺、探针浓度等条件的优化。常用的ph范围为6.5~7.5，较高的ph值有助于提高杂交的严谨性。

在选用探针时经常会受到可利用探针种类的-。如在建立dna-时，手头没有筛选特定基因的克0隆探针，这时就可用寡核苷酸探针来代替。但必须首先纯化该基因的编码蛋白，并测定6个以上的末端-酸序列，通过反推的核苷酸序列合成一套寡核苷酸探针。如果已有其它动物的同种基因克0隆，因为人类和动物间在同一基因的核苷酸顺序上存在较高的同源性，因此可利用已鉴定的动物基因作探针来筛选人类基因克0隆。对于基因核苷酸序列背景清楚而无法获得克0隆探针时，可采用pcr方法扩增某段基因序列，并克0隆人合适的质粒载体中，即可得到自己的探针。这种方法十分简便，无论基因组dna探针还是cdna探针都可以容易地获得，而且，可以建立pcr的-方法，与探针杂交方法可作对比，可谓一举两得。

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