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lncrna芯片

long non-coding rnaslncrnas是一类转录本长度超过200 nt的功能性非编码rna分子。目前的研究已证实，lncrna参与x染色体沉默，基因组印记以及染色质修饰，转录ji活，转录干扰，核内运输等多种重要调控过程。但是长期以来，-的蛋白质表达分析谱并没有提升我们对生物标志物的认识，其主要原因是差异蛋白的分析结果缺乏规模化的验证。随着对lncrna在哺乳动物进化及人类---发生和发展中作用的日益关注，lncrna调控机制已成为当前遗传学研究的-问题。

筛选出差异表达的lncrna是研究其在人类---发生中所扮演角色的基础。富衡生物为用户提供高通量的lncrna芯片进行lncrna表达谱分析，该芯片基于agilent的sureprint技术生产，实验。

技术优势

信息覆盖广泛：覆盖了多个quan威lncrna数据库发布的数据；提供人，小鼠，大鼠的lncrna检测。

lncrna和mrna同时检测：芯片上包含有的lncrna和新的mrna序列检测探针。一次芯片实验可同时对lncrna和mrna进行分析。

平台成熟---：采用agilent原位喷墨合成技术，了高检测灵敏度和特---。

数据分析：提供lncrna和mrna表达谱差异分析和功能分析，以及二者的关联分析。

1. 引物是如何合成的？

目前引物合成基本采用固相亚---胺三酯法。dna合成仪有很多种, 主要都是由abi/pe 公司生产，而bioneer自行研制的384并行高通量dna合成仪，可实现99%的高合成率。该研究结果发表在《naturebiotechnology》上。无论采用什么机器合成，合成的原理都相同，主要差别在于合成产率的高低，试剂消耗量的不同和单个循环用时的多少。

亚---胺三酯法合成dna，具有、快速的偶联以及起始反应物比较稳定的特点。亚---胺三酯法是将dna固定在固相载体上完成dna链的合成的，合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的，相邻的核苷酸通过3′***5′磷酸二酯键连接。

步是将预先连接在固相载体cpg上的活性基团被保护的核苷酸与---反应，脱去其5′----的保护基团dmt，获得游离的5′----。

第二步，合成dna的原料，亚---胺保护核苷酸单体，与活化剂四氮唑混合，得到核苷亚磷酸活化中间体，它的3′端被活化，5′----仍然被dmt保护，与溶液中游离的5′----发生缩合反应。

第三步，带帽(capping)反应，缩合反应中可能有数5′----没有参加反应(少于2%)，用酐和1-咪唑终止其后继续发生反应，这种短片段可以在纯化时分离掉。

第四步，在氧化剂碘的作用下，亚---形式转变为更稳定的磷酸三酯。

经过以上四个步骤，一个脱氧核苷酸被连接到固相载体的核苷酸上。再以---脱去它的5′----上的保护基团dmt，重复以上步骤，直到所有要求合成的碱基被接上去。合成过程中可以观察tca处理阶段的颜色判定合---率。

通过---高温处理，连接在cpg上的引物被切下来，通过opc,和page等手段纯化引物，成品引物用c18浓缩、脱盐，沉淀。沉淀后的引物用水悬浮，测定od260定量，根据定单要求分装。

13.合成的引物5端是否有磷酸化

答：合成的引物5为---，没有磷酸基团。如果需要您可以用多核苷酸激酶进行5′端磷酸化，或者要求引物合成公司合成时直接在5′或3′端进行磷酸化，需要另外收费。

14.引物片段退火后不能连接到载体上是什么问题？

连接反应需要引物的5磷酸基团。如果需要将合成的引物退火直接连接相应的载体上，引物需要磷酸化。蛋白提取大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液,少数与脂类结合的蛋白质则溶于---、---等有ji溶剂中，因些，可采用不同溶剂提取分离和纯化蛋白质及酶。磷酸化的产物如果还不能连接载体上，需要检查载体的酶切效果，需要---引物退火的条件。sirna分子具有特殊的对称结构，退火的难度较大，退火时需要提高退火温度。