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2. 蛋白质溶解于合适的溶剂中,从中它能通过一种盐或有机化合物而析出。溶剂通常是水-缓冲剂溶液,有时加,如2--2,4-mpd。正常情况下,沉淀剂也被加入,但是浓度不高于使沉淀产生。对于不溶于水-缓冲剂或水-的膜蛋白,还需要加入去污剂。
3. 使溶液过饱和。在这一步中,小---体形成,它是晶体生长所需的核。对小分子的结晶来说,相比于蛋白质更为人熟知,晶核的自发形成需要提供表面张力能。一旦这个能障被突破了,晶体开始生长。能障在高水平的过饱和度时很容易克服。因此,在高过饱和度时,晶核更易自发形成。晶核的形成可作为一个过饱和度和其他参数的函数通过多种方法来研究,包括光散射、荧光去极化及电子显微镜。
4. 一旦晶核形成,晶体生长正式开始。对低分子量的化合物而言,新分子会逐步结合到正在生长的晶体表面。这是由于这些位置的结合能比较大,相对于分子结合到平滑的表面。这些步骤要么由晶系缺陷造成,要么发生在表面随机形成的晶核。
蛋白结晶板过程是一种重要的分离过程单元操作,由于机理的复杂性以及动态特性使得该过程的数学模型研究非常具有挑战性.本文从间歇结晶过程建模和动态模拟,动态优化,模型辨识以及鲁棒优化与控制等方面,介绍了间歇结晶过程数学模型的研究进展,评述了其中的关键问题和求解技术.-对结晶过程的机理进一步深入认识,开发数值稳定,精度更高的求解算法是间歇结晶过程数学模型研究的基础.全局优化效果较好的进化算法和模型预测控制理论在结晶过程动态优化和控制中的应用是今后的研究方向。
设计并制作了一种在微腔中对蛋白质进行微批量法(microb---h)结晶的碟式微流控结晶芯片,它是一种高通量、低成本、低耗样量(纳升级)、操作简便的蛋白质结晶筛选方法,这种芯片能成功地结晶溶菌酶(lysozyme)和青色荧光蛋白(cypet).为了系统地比较这种微流控芯片与传统的使用蒸汽扩散法的24孔结晶板的结晶能力,用3个hampton结晶试剂盒,在4℃及20℃培养条件下分别对5种标准蛋白(溶菌酶(lysozyme)、木聚糖酶(xylanase)、脂肪酶b(lipase b)、---异构酶(glucose isomerase)和嗜热菌蛋白酶(thermolysin))进行了结晶筛选实验.结果表明,在4℃时微流控芯片与24孔结晶板有相近数目的结晶条件(91 vs 98)。
蛋白质作为生命活动的载体,研究其分子结构及发挥生物活性的机制具有重要意义.结晶作为研究生物大分子结构及功能的重要手段,近年来发展迅速.介绍影响蛋白质结晶的因素、目前常用的蛋白质结晶方法以及提高蛋白质结晶条件筛选率和衍射的新技术和新策略,这对蛋白质结晶的研究有一定的推动作用。
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