防污染探针-量服务介绍 武汉友名生物

聚合酶链式反应pcr是一种用于放大扩增特定的dna部分片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊dna copy，pcr的zui大特点是能将微量的dna大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的-，还是几十年前凶1-中凶1手所-的毛发、皮肤或-，只要能分离出一丁点的dna，就能用pcr加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易dna扩增法，意味着pcr技术的真正诞生。到如今2013年，pcr已发展到第三代技术。1976年，中国科学家钱嘉韵，发现了稳定的taq dna聚合酶，为pcr技术发展也做出了基础性贡献。

pcr循环参数

预变性模板dna完全变性与pcr酶的完全激1活对pcr能否成功-，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的taq酶激1活时间为两分钟。 

变性步骤：循环中一般95℃，30秒-使各种靶dna序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不，易造成扩增失败。 

引物退火：退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对pcr的特-有较大影响。

引物延伸：引物延伸一般在72℃进行taq酶zui适温度。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般在1000bp以上，含pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。

循环数：大多数pcr含25-35循环，过多易产生非特异扩增。

zui后延伸在zui后一个循环后，反应在72℃维持10-30分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。

原位pcr仪

它是由主机，加热模块，玻片，热盖，控制软件组成。主要是应用对细胞或组织内的dna部分片段进行原位扩增分析-即定位分析，如病源基因在细胞的位置或目的基因在细胞内的作用位置等。是保持细胞或组织的完整性，使pcr反应体系渗透到组织和细胞中，在细胞的靶dna所在的位置上进行基因扩增，不但可以检测到靶dna，又能标出靶序列在细胞内的位置，于分子和细胞水平上研究-的发病机理和-过程及病理的转变有重大的实用价值。它无需将细胞破碎提取dna，细胞内有dna酶的作用扩增受到一定的影响，使用不是很普遍。

该仪器主要应用于医学-研究，如癌细胞等。

污染原因：

1、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本-模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染；有些微生物标本尤其是-可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。

2、pcr试剂的污染：主要是由于在pcr试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被pcr-模板污染。

3、pcr扩增产物污染：这是pcr反应中主要常见的污染问题。因为pcr产物拷贝量大一般为1013拷贝/ml，远远高于pcr检测数个拷贝的-，所以极微量的pcr产物污染，就可形成假阳性。还有一种容易忽视，可能造成pcr产物污染的形式是气溶胶污染。在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地摇动反应管，开盖时、吸样时及污染进样枪的反复吸样都可形成气溶胶而污染。据计算一个气溶胶颗粒可含48000拷贝，因而由其造成的污染是一个值得-重视的问题。

4、实验室中质粒的污染：在分子生物学实验室及某些用质粒做阳性对照的检验室，这个问题也比较常见。因为质粒在单位容积内含量相当高，另外在纯化过程中需用较多的用具及试剂，而且在内的质粒，由于的生长繁殖的简便性及具有很强的生命力。其污染可能性也很大。