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对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落100-200进行筛选时，可采用该方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。这些改造后的基因在启动子区有相同的转录因子结合位点，因此可以被相同的转录因子如上述的gal4蛋白。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。

简称原位杂交，in situ hybridization histochemistry；组织中-dna/rna的检测和定位，如eb-mrna、人类状瘤-和巨细胞-dna的检测。ishh属于分子杂交的一种，是一种应用标记探针与组织细胞中的待测-杂交，再应用标记物相关的检测系统，在-原有的位置将其显示出来的一种检测技术。原位杂交的本质就是在一定的温度和离子浓度下，使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的-复性结合而使得组织细胞中的特--得到定位，并通过探针上所标记的检测系统将其在-的原有位置上显示出来。

石蜡切片的fish要点

1组织固定，采用ph7.2的10%甲醛固定24h是比较适合的，ph很重要。较厚的组织块建议切开后再固定。这一点小编已经反复提过很多次了。-的固定是所有病理实验的前提。

2对于石蜡切片来说，采用蛋白酶k作为-液是-的选择。-条件20g/l蛋白酶k在50℃下-20min。胃蛋白酶是极易失活的，失活了就没法充分-，-过度又会使细胞核变模糊。综合来看，小编更蛋白酶k。

3石蜡切片的杂交温度一般都是37摄氏度。而杂交时间则需要摸索才能得到-时间。不过，一般的过夜孵育基本可以达到目的。

4fish实验中非特-着色是个难以避免的问题，我们能做的就是尽量减少背景。具体可作为的地方：充分严格漂洗、全程避免干片、探针浓度不宜太高、杂交温度要控制在37℃。