PCR仪基因扩增仪公司「多图」
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实时荧光定量pcr仪,由荧光定量系统和计算机组成,用来监测循环过程的荧光。
与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。
原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异。正常化后可以设定域值水平,这就是分析荧光数据的水平。
-检验
漏检率由于实时荧光定量pcr方法比elisa灵敏很多,因此,血站或-研究所一般用来研究elisa方法的漏检率,即分析elisa方法测定为阴性的血样,再用实时荧光定量pcr方法来复检。复检时,一般24个elisa阴性的血样混合成一个样本进行检测。上海用此方法在用于-制品的-中发现一例hiv,后经测定供血者,证实人的确是hiv阳性。北京市红十字-中心正在测定北京血站中5万份elisa阴性血样的漏检率。由于不同地区所用的elisa试剂、方法、批号等都不相同,因此不同地区都有-进行这一工作。
pcr扩增时在加入一对引物的同时加入一个特-的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;刚开始时, 探针结合在dna任意一条单链上;pcr扩增时,taq酶的5端-3端外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条dna链,就有一个荧光分子形成,实现了荧光信号的累积与pcr产物形成完全同步。或者使用荧光染料sybr。sybr可以结合到双链dna上面,当体系中的模板被扩增时,sybr可以有效结合到新合成的双链上面,随着pcr的进行,结合的sybr染料越来越多,被仪器检测到的荧光信号越来越强,从而达到定量的目的。
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