温州PCR实验室动物实验模型 英瀚斯生物科技公司

二、大肠菌群检验方法:

由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的---，即:需氧及兼性厌氧、在37°c能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。 目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有和原商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。染色质免l疫沉淀分析(chip)的基本原理是在活l细胞状态下，当用甲醛处理时，相互靠近的蛋白与蛋白、蛋白与-(dna或rna)之间会产生共价键。

(一):采用三步法，即:乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。乳糖发酵试验:样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36士1c培养48土2h，观察是否产气。分离培养:将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36士1°c培养18-24h，观察菌落形态。证实试验:挑取平板上的菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36士1°c培养24土2h,观察产气情况。-般:在93°c预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93°c40s***58°c30s***72°c60s,循环30-35次，后在72°c保温7min。

报告:

根据证实为大肠阳性的管数，查mpn表，报告每100ml ( g)大肠菌群的mpn值。具体操作参见gb4789. 3-94 《------食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》

(二)原商检局制订的行业标准，等效采用美国fda的标准方法，用于对出口食品中的大肠进行检测。本方法采用两步法：推测试验:样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管lst肉汤。36士1c培养48士2h，观察是否产气。证实试验:将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐(bglb)肉汤管中，36士1°c培养48士2h，观察是否产气。以bglb产气为阳性。查mpn表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的mpn值。4、聚合完成后，sybrgreen染料与双链产物结合，定量pcr系统检测到荧光的净增量加大。具体操作参见sn0169-92《------进出口商品检验行业标准 出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠检验方法》

southern杂交

实验原理

      southern印迹杂交southern blot是1975年由英---southern创建，是研究dna图谱的基本技术。southern印迹杂交是进行基因组dna特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经---性内切酶---的dnal片段，将胶上的dna变性并在原位将单链dnal片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放l射自显影或酶反应显色，从而检测特定dna分子的含量。3-94《---------食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》(二)原商检局制订的行业标准，等效采用美国fda的标准方法，用于对出口食品中的大肠进行检测。

rna pull down 检测

rna   pull down：rna沉淀检测，是检测rna结合蛋白与其靶rna之间相互作用的主要实验方法之一。使用体外转录将rna进行生物素标记，并与细胞蛋白裂解液孵育，形成rna-蛋白复合物。复合物通过磁珠结合后分离，复合物纯化洗脱后通过western blot验证检测特性的蛋白。若筛选可能结合的蛋白通过质谱实验进行检测筛选。于是,我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的snp等位位点称作单体型(haplotypeb大多数染色体区域只有少数几个常见的单体型(每个具有至少5%的频率),它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。

注意事项

1. 为了避免蛋白---性，不要对样品剧烈搅动和反复冻融。

2. 缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环。。

3. 为了避免蛋白质的氧化，将 0.1～1 mmol/ldtt二硫苏糖醇(或 β-巯加入到缓冲溶液中。

4. 为了避免重金属对目标蛋白的破坏，将 1～10 mmol/ledta 金属螯合剂加入。

5. 为了避免微生物生长，使用灭菌溶液。在纯化任何一种蛋白质的时候，均必须时刻对它的稳定性注意维护，使它的活性得到保护，需要牢记如下一些通用的注意事项。

6. 尽可能置于冰上或者在冷库内进行操作。

7. 蛋白浓度不要太稀。

8. 除非是进行-层。否则 ph 需要合适，防止所使用的缓冲溶液 ph 与 pi 相同，使蛋白质的沉淀得以避免。

9. 使用蛋白酶，避免蛋白酶对目标蛋白的降解；在纯化细胞中的蛋白质时，将 dna 酶加入来使得 dna 降解，避免 dna 对蛋白的污染。