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蛋白表达系统分类及优劣分析

原---白表达系统既是zui常用的表达系统，也是经济实惠的蛋白表达系统。原---白表达系统以大肠杆1菌表达系统为代表，具有遗传背景清楚、成本低、表达量高和表达产物分离纯化相对简单等优点，缺点主要是蛋白质翻译后缺乏加工机制，如二硫键的形成、蛋白糖基化和正确折叠，得到具有生物活性的蛋白的几率较小。

酵母蛋白表达系统以甲1醇毕赤酵母为代表，具有表达量高，可-，糖基化机制接近---真核生物，分泌蛋白易纯化，易实现高密发酵等优点。缺点为部分蛋白产物易降解，表达量不可控。

哺乳动物细胞和昆虫细胞表达系统主要优点是蛋白翻译后加工机制比较接近体内的天然形式，相对容易保留生物活性，缺点是表达量通常较低，稳定细胞系建立技术难度大，生产成本高。

微量凯氏kjeldahl定氮法

样品与浓1---共热。含氮有机物即分解产生氨---，氨又与---作用，变成---氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸为例，其反应式如下：

nh2 ch2 cooh+3h2 so4 ――2co2 +3so2 +4h2o+nh3 (1)

2nh3 +h2 so4 ――(nh4 )2 so4 (2)

(nh4 )2 so4 +2naoh――2h2 o+na2 so4 +2nh3 (3)

反应1、(2)在凯氏瓶内完成，反应3在凯氏蒸馏装置中进行。为了加速---，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。实验和计算方法这里从略。计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。