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荧光分光光度计测试注意事项

样品应盛在四面透光的石英比色皿荧光池中，如果是挥发性样品应使用带塞的荧光池。

在荧光分析时，为了得到稳定且-的数据，一般需要开机预热氙灯大约30min。如果仪器光源采用的是闪烁氙灯，预热时间可以缩短到10min左右。对某些易感光、易分解的荧光物质，尽量采用长波长、低人射光强度及短时间光照。

温度变化可引起荧光强度的改变。通常降低温度，有利于提高荧光量的子产率，荧光强度增大。温度影响荧光强度的-程度因样品而异，大部分荧光物质的荧光强度受温度影响不大，测试温度变化不超过±3℃，对测试结果几乎无影响。

当荧光物质是弱酸或弱碱时，溶液的ph对荧光强度有较大影响。因为弱酸或弱碱在不同酸度中，分子和离子的电离平衡会发生改变，而荧光物质的荧光强度会因其离解状态发生改变。

分子结构中存在π-π共轭的荧光物质在极性溶剂中，荧光效率-增强。溶液中表面活性剂的加入能够-提高荧光强度。

瑞利散射和拉曼散射是溶剂的两种散射光，应注意不要误把瑞利散射和拉曼散射光谱当做荧光光谱。瑞利散射光波长与激发光波长相同，拉曼散射与激发光波长不同，而荧光物质的荧光波长与激发光波长无关，因此可以通过选择适当的激发波长将拉曼散射光与荧光分开。在测试时选择合适的狭缝宽度，或者空白扣除，也可以对散射光的影响进行校正。

荧光物质分子与溶液中其它物质分子之间作用导致荧光强度降低，常见的荧光猝灭剂，如卤素离子、重金属离子、-化物质、-化合物等。

测试过程中注意不要肉眼盯着氙灯光源看，以防眼睛造成损伤。

仪器房应注意经常通风，避免产生的臭氧在室内富集。

浅析荧光光谱

无论分子初处于哪一个激发单重态，通过内转换及振动弛豫，均可返回到激发单重态的低振动能级，然后再以辐射形式发射光而返回至基态的任一振动能级上,这时发射的光称为荧光。由于振动弛豫和内转换损失了部分能童，故荧光的波长总比激发光波长要长。发射荧光的过程为 秒。由于电子返回基态时可以停留在基态的任一振动能级上，因此得到的荧光谱线有时呈现几个非常靠近的峰。通过进一步振动弛豫，这些电子都很快地回到基态的低振动能级。