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液-液扩散(liquid–liquid diffusion) 这种方法中,蛋白质溶液和含有沉淀剂的溶液是彼此分层在一个有小孔的毛细管中,一个测熔点用的毛细管一般即可如图1.2。下层是密度大的溶液,例如铵或peg溶液。如果如mpd被用作沉淀剂,它会在上层。以1:1混合,沉淀剂的浓度应该是所期终浓度的二倍。两种溶液各自约5μl通过针头导入毛细管,先导入下层的。通过一个简易的摇摆式离心机去除气泡。再加入上层,进而两层之间形成一个明显的界面,它们会逐渐彼此扩散。 garc′?a-ruiz&moreno1994已经发展液-液扩散技术至法。蛋白质溶液通过毛细力被吸入狭窄的管中,管的一端是封闭的。接着,开放端入置于小容器的凝胶中,凝胶使得管竖直,蛋白质溶液与凝胶接触。含有沉淀剂的溶液被倒在凝胶上,整个装置被保存于封闭的盒子以防蒸发。沉淀剂通过凝胶和毛细管的扩散时间可以由毛细管插入凝胶的-控制,从而蛋白质溶液中即可形成过饱和区域,毛细管底部高而顶部低。这也可作为一个筛选佳结晶条件的额外信息。
在基因组、蛋白质组、纳米技术中,结晶学是一门关键的科学。在这些研究领域中,通过x射线进行单晶结构分析来探测分子的三维结构是很重要的技术。其中大分子晶体研究是主要的挑战,greiner生产一系列的产品来满足这一应用。
应用于“沉滴”sitting drop,与gnfgenomics institute of the novartis research foundation、mpmax-planck institute、psfprotein struktur fabrik合作开发、crystalquick?用于高通量蛋白质结晶。在沉滴中,可用viewseal?密封。若与crystaldrop?盖共同使用,也可同时应用于“悬滴”。
半胱氨酸、赖氨酸的蛋白质、以及含有金属离子的蛋白质。这些蛋白质的吸附会导致重组蛋白质纯度大幅降低。为了解决这一问题,我们制备了两类新材料,用于提高重组蛋白质纯度:1)通过分子印迹技术,以组氨酸标签为模板,在imac材料表面形成组氨酸标签的分子印迹层,使得不含组氨酸标签的蛋白质无法靠近imac材料,从而提高重组蛋白纯度;2)通过活性可控自由基聚合,在imac基质材料表面包被了一层尺寸可控的聚合物涂层。在聚合物网络的筛分作用下,进而实现带组氨酸标签的重组蛋白的纯化。
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