反转扩增双功能DNA聚合酶-「友名生物」

pcr扩增的基本原理

基本原理：pcr技术的基本原理类似于dna的天然copy过程，其特-依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。dna的半保留复1制是生物进化和传代的重要途径。双链dna在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在dna聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则copy成同样的两分子拷贝。

在实验中发现，dna在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制dna的变性和复性，加入设计引物，dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的体外复1制。

pcr技术不仅可用于基础研究，还适用于日常的-诊断、-学调查和农业生物技术研究。这些应用要求-的性能、及时的灵敏度和严格的标准。因此，所使用的pcr仪和pcr试剂必须符合这些要求和目的。

分子诊断应用包括-、-突变检测以及感1染性-检测。在-学中，利用 pcr进行人类身份鉴定是通过对-的短串联重复序列str进行扩增而区分个体的。在农业学中，pcr在食物病原体检测、育种植物基因分型和 gmo测试中具有重要作用。

 pcr反应五要素

参加pcr反应的物质主要有五种即引物(pcr引物为dna部分片段,细胞内dna复1制的引物为一段rna链)、酶、dntp、模板和缓冲液(其中需要mg2+)。

[pcr步骤]标准的pcr过程分为三步:

1.dna变性(90°c-96*c): 双链dna模板在热作用下，氢键断裂，形成单链dna

2.退火(25c-65c): 系统温度降低，引物与dna模板结合，形成局部双链。

3.延伸(70°c-75*c): 在taq酶(在72c左右，活性zui佳)的作用下，以dntp为原料，从引物的5端***3端延伸，合成与模板互补的dna链。

每一循环经过变性、退火和延伸，dna含量即增加一倍。现在有些pcr因为扩增区很短，即使taq酶活性不是zui佳也能在很短的时间内copy完成，因此可以改为两步法，即退火和延伸同时在60°c -65c间进行，以减少一次升降温过程，提

高了反应速度。