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固相萃取(solid phase extraction,简称 spe)是一种以液-固色谱分离为基础的前处理技术,可对目标化合物进行选择性吸附和选择性洗脱。按保留机理,力主要分为无极力作用、极力作用、离子交换(静电吸引)。
反相态是 spe小柱中相对于流动相极性较低的分离态。本发明主要利用固定相-团的碳氢键和目标化合物的碳氢键之间的非极性作用力,适合从极性基质中提取分离非极性和中极性的目标物。
对由非极性力吸附到反相 spe柱上的目标物,可用弱极性溶剂,如氯1仿、环己1烷、乙1酸乙1酯等洗脱。只有当溶剂的洗脱强度足够大时,才能使目标物与吸附剂之间的范德华力破坏,使目标物从 spe柱洗脱。即使是极性-的甲1醇,对许多化合物而言,也有足够的非极性力量来洗脱它。有时候,单种溶剂无法-洗脱疏水性强的目标物,可以考虑使用二1氯甲1烷:乙1酸乙1酯(1:1,体积比)。
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正相填充(silica,nh2, cn, florisil, diol, carb,alumina-n, a, b)
*分析物:中等极性至强极性
*基质:从非极性到中极性
·方法:
(a)激1活:非极性有机溶1剂(通常由上样液所在的有机溶1剂激1活)
(b)洗脱:非极性有机溶1剂(一般是上样液所在的有机溶1剂)
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普通反相液相色谱柱是一种-极1佳的产品。c18反相层析柱
采用全覆盖键合硅胶作填料,稳定性好。采用的单-团化学键技术可以避免c18分子层的合成。涂覆均匀,-了高选择性、高1效率的固定相分离。
普通反相液相色谱柱具有优异的稳定性, ph适用范围较宽(1.5~11),峰形优良。而且抗污染能力强,柱子使用-。
一般情况下,反相液相色谱柱在使用缓冲液时还需注意以下事项:
(a)避免使用-盐,因为它会腐蚀钢制品;
(b)缓冲液较好的是现在就用,通常缓冲液是好的菌1种培养液,隔天或放一段时间后就会出现许多怪现象;
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使用缓冲液时要及时掌握 ph值,做到胸中有数;
(d)有温度控制的洗液道和柱子加热到30摄氏度,便于冲洗;
(e)长时间使用缓冲液应注意观察接头处是否有沉淀,如有白色盐沉淀,用10%硝1酸定期冲洗液路(拆除柱子,冲洗30 ml10%硝1酸溶液,再用5倍水冲洗)可避免液路堵塞;
(f)使用-的试剂来选择缓冲液,以避免不纯盐带来的不-麻烦;
转化流相是指有机相和水相的组成与分析流相相同,但溶液中没有缓冲盐。
spe小柱相极固定比流动相极性大的分离模式称为正相模式。主要用途:
固相萃取材料极性表面与物极性-团极性相互作用;极性力比非极性力强,但比离子力弱;常用的极性基团有-,胺基,巯基等。弱极化基质环境有利于形成极性力,因为弱极化溶剂不能与极性固定相形成氢键功能团。结果表明: spe正相萃取后,样品基质多为弱极性,如正-、-甲i烷、菜油等,而目标物多含有极性-团。常用极性固定相包括:硅胶、氧化铝、弗罗里硅土和含有-基(cn)、-(nh2)、二醇基(2 oh)的粘接硅胶。
gp-c18通用反相色谱柱特点:
利用高可控性的单分子层形成技术和封尾技术
*柱间重现率高
*选择性和分离效i率高
适宜于分离酸性i、中性和碱性化合物,以及多种药i物和多肽等
建议使用有i机溶剂或有i机溶剂/水系统的流动相。
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清洗与干燥参数选取:若目标化合物为中性化合物,且选择了疏水性的非极性填料(如c4、c8、c18等),则可用水或柱子平衡的缓冲液清洗。若分析物对固相萃取柱的吸附能力较强,则可在洗涤液中加入水溶性,提高洗涤效果。
当发现回收率下降时,收集该组分,并检测目标化合物是否在这一阶段被洗脱。若经调整 ph使可离子化目标化合物中性化,并通过疏水力被 spe柱吸附,则必须注意洗涤时 ph保持不变,以免由于 ph的变化而导致目标化合物在洗涤过程中丢失。
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若目标化合物为阴或阳离子(如采用 sax、 psa、nh2、 scx、 cba和 prs等离子交换柱萃取),可用柱平衡的缓冲液清洗。对带单电分析物,缓冲液的离子强度不能超过50 mmol/l。对带双电的分析物,缓冲液的离子强度不能超过10 mmol/l。
水份的存在对特定环境中目标化合物的洗脱及后续分析有一定的影响。所以 spe柱必须先干燥,然后才能洗脱。烘干方法通常采用正、负压力。
正压法通常是将带一定压力的空气或氮气从 spe柱上吹走填料中的水;负压法则是将一定真空度从萃柱下吹走残余的水。有时候,为了-地去除残余的水份,可以使用量的极性,比如50μ l。若目标化合物易挥发,要注意控制正压/负压除水时间,避免在干燥过程中造成损失。
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