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液相色谱仪色谱柱失效的原因

装填-的色谱柱，在短时间应用后，填充床的压缩通常使柱头处产生塌陷，导致柱效突然降低。液相色谱仪色谱柱的初始评价指标，如塔板数、不对称因子等往往不能-地表征色谱柱床层的稳定性，这种情绪只能在实际应用中发现。

液相色谱仪色谱柱使用过程中的骤然压力波动、机械撞击或温度骤然变化都会对色谱柱床层产生影响，导致峰形变差和柱效降低。进样过程中，进样阀转动太慢可引起压力波动，使色谱柱床产生裂隙，在柱切换时也存在同样的问题。使用填充-的色谱柱，在较低柱压下操作，可大大减少由压力波动造成的色谱柱损坏。

液相色谱柱的保存

1.反向色谱柱实验后的保养：

使用缓冲液或含盐的流动相，实验完后应用10%的/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的，防止将填料冲塌陷。

2.长期保存色谱柱：

如，色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下，对于反相柱可以储存于纯或中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正-中，离子交换柱可以储存于水中，并将堵头堵上，储存温度尽量是室温。

液相色谱柱外界因素影响

色谱是一种分离分析手段，分离是，因此担负分离作用的色谱柱是色谱系统的-。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好，分析速度快等。市售的用于hplc的各种微粒填料如多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球包括离子交换树脂、多孔碳等，其粒度一般为3,5,7,10μm等，柱效理论值可达5~16万/米。对于一般的分析只需5000塔板数的柱效；对于同系物分析，只要500即可；对于较难分离物质对则可采用-2万的柱子，因此一般10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。

柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到佳效率，除柱外死体积要小外，还要有合理的柱结构尽可能减少填充床以外的死体积及装填技术。即使好的装填技术，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的，靠近管壁的部位比较疏松，易产生沟流，流速较快，影响冲洗剂的流形，使谱带加宽，这就是管壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。在一般的液相色谱系统中，柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。

液相色谱柱的安装

1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积，进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线，同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度。安装色谱柱之前，确认流路系统中的溶剂是否正常。对分析较复杂的样品建议安装保护柱。

2、为了使色谱柱与仪器系统达佳的连接效果，应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头，如原来的接头长期匹配其他类型的色谱柱，建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况，避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液。

3、使用peek 材料的通用接头，只需用手拧紧不需要特定扳手，使用压力为5000psi；使用温度不得超过100℃。