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基于基因工程技术制备小分子特-antibody

通过大量的实验发现，小分子的偶联物并不是不能产生特-针对小分子的抗1体，而是效价过低，不满足制备多克1隆抗1体和单克1隆抗1体的需要，但是基因工程手段为制备该类型小分子特-antibody提供了新的思路。该技术的-在于制备antibody的基因-，通过噬菌体展示技术、核糖体展示技术等获取antibody的目的基因，再利用蛋白表达系统制备重组antibody或者改造antibody，以获取针对小分子的特-antibody。目前随着antibody基因测序信息的公布和完善，为人工设计antibody提供了基础，这也会以后小分子特-antibody的制备提供了新的途径。

回收产物的检测

1.紫外分光光度计法检测dna在od260处有明显吸收峰，当od260=1时，相当于大约50 ng/μl双链dna、40 ng/μl单链dna。od260/od280≈1.6~1.9时，说明dna纯度较高。若洗脱时不用洗脱缓冲液，而是用去离子水，会使比值偏低，因为离子的存在会影响吸光度。但不表示纯度低。

2.sybr法检测取回收产物1 μl，与1 μl sybr染料混匀，于荧光透1视仪下观察是否有黄绿色荧光。

3.琼脂糖凝胶电泳法检测取回收产物5 μl，与10×loading buffer混匀，dna marker加5 μl，电泳后凝胶成像观察。5 μl dna marker相当于每个条带50 ng dna，观察目的条带亮度大致为marker的两倍，则大致估算其浓度约为20 ng/μl。

酵母基因组dna提取好方法

dna提取主要是ctab方法，其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫cn酸胍法、碱裂解法。生物方式：酶法。根据-分离纯化方式的不同有；硅质材料、阴离子交换树脂等。

提取基因组dna和细胞核dna是不同的方法

提取细胞核要先把细胞破碎分离出细胞核,要在甘油或其他保护剂中进行

sds十二烷-酸钠：可破坏细胞膜、核膜,并使组织蛋白与dna分离

catb是一种抽提液,破坏细胞膜的~

dna不溶于-1醇,-1醇可以析出dna,产生白色絮状沉淀,用枪头挑出就可以了

提取dna常用的方法

　　一.酚抽提法：先用蛋酶k、sds破碎细胞，-蛋白，然后用酚和酚-氯dna大小为100-150kb

　　二.-胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度-胺解聚蛋白质与dna的结合，再透析获得dna可得dna200kb左右。

　　三.玻璃棒缠绕法：用-胍裂解细胞，将裂解物铺于-上，然后用带钩或u型玻璃棒在界面轻搅，dna沉淀液绕于玻棒。生成dna约80kb。

　　四.-1醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积-1醇替代-，可去除小分子rna(在-1醇中可溶状态)

　　五.表面活性剂快速制备法：用triton x-100a或np40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶k或酚去除蛋白，-沉淀或透析。

　　六.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于pcr反应。

　　七.碱变性快速制备：先用naoh作用20分钟，再加hci中和，离心后取上清，含少量dna。