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原位杂交是指将特定标记的已知顺序-为探针与细胞或组织切片中-进行杂交,从而对特定-顺序进行精0准确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。
原位杂交in situ hybridization将标记的-探针与细胞或组织中的-进行杂交,称为原位杂交。
使用dna或者rna探针来检测与其互补的另一条链在---或其他真核细胞中的位置。
杂交技术zui重要的因素之一是选择zui适的杂交反应温度。若反应温度低于tm 10~15℃,碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链,错配对减少。若反应温度再低tm-30℃,虽然互补链之间也可形成稳定的双链,但互补碱基配对减少,错配对增多、氢键结合的更弱。如两个同源性在50%左右或---些的dna,调整杂交温度可使它们之间的杂交率变化10倍,因此在实验前必须首先确定杂交温度。通常有三种温度可供试验,即zui适复性温度、苛刻复性温度及非苛刻复性温度。温度的选择及温度对杂交的影响见表18-3。
zui适复性温度optimunm renaturation temperature, tor:tor =tm –25℃
苛刻复性温度:ts = tm – (10或15℃)
非苛刻复性温度:tns =tm – (30或35℃)
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