河北感受态细胞-系统模型「英瀚斯」

小鼠精原gan细胞分离富集和培养

成年小鼠gao丸中约有108个细胞,其中约有 2×104个是精原gan细胞,仅占gao丸生精上皮细胞总数的 0.02～0.03%,精原gan细胞数量太少不利于体外培养.分离和富集精原gan细胞成为精原gan细胞体外培养能否成功的前提条件.寻找分离和富集小鼠精原gan细胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠为实验对象,先用0.25%胰酶1mm edta-gao丸10min,用胎牛xue清终止-,用一次40-um孔径的滤器过虑制成单 细胞悬液,30%percoll不连续密度梯度法离心富集精原gan细胞,再根椐未分化精原gan细胞表面thy1.2(cd90.2)阳性cd117(c- kit)阴性特点用流式细胞仪将精原gan细胞分选出来,并在体外进行培养尝试. 结果:30%percoll密度梯度离心前cd117(c-kit)阳性细胞占13.80±3.34%,cd90.2阳性细胞占28.98±4.51%, 二者都阳性细胞占8.98±2.98%,cd117阴性cd90.2阳性细胞占18.36±2.67%;离心后 cd117(c-kit)阳性细胞占12.37±3.34%,cd90.2阳性细胞占56.98±4.51%,二者都阳性细胞占 8.20±3.98%,cd117阴性cd90.2阳性细胞占32.36±3.67%;cd117(c-kit)阳性细胞和二者都阳性细胞所占百分比前后 比较差异无-性(p>;0.1),cd90.2阳性细胞和cd117阴性和cd90.2阳性细胞所占百分比前后比较差异有-性 (p<0.05);采用cd117和cd90.2作为标志分子,percoll离心后细胞悬液经facs分选后获得细胞纯度

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-是指同一来源的细胞逐渐产生出形态结构、功能特征各不相同的细胞类群的过程，其结果是在空间上细胞产生差异，在时间上同一细胞与其从前的状态有所不同。细胞长满后，先用d-pbs冲洗，倒掉后加胰酶-(此步时间不宜过长，作者--般不超过五分钟)，按1:5传代。-的本质是基因组在时间和空间上的选择性表达，通过不同基因表达的开启或关闭，终产生-蛋白质。细胞-是指将一群不同类型或者形态结构、功能特征存在差异的细胞通过生物学、物理学等手段，将之转变为具有相似/相同形态结构、功能特征的细胞群体的过程。

细胞培养中常见的污染及解决方法

支原体污染

支原体是隐蔽的污染物，不能通过过滤去除。显微镜下没有任何可见的支原体污染迹象，比如细胞病变和浊度或 ph 值变化即使在-污染的培养基中，这样就会导致我们产生错误的-。而在牛中，支原体是常见的微生物之一。

解决方法：通常的过滤灭菌方法对支原体没有影响。1、直接磁性细胞标记(direct-iccelllabeling)(磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞)直接标记是快速、zui特异的磁性标记方法。细胞一旦被支原体污染，-是对重要的细胞系，必须去除支原体，一般的方法有、抗和抗与补体联合。值得注意的是，支原体很-的结构特征是没有细胞壁。因此，它对作用于细胞壁的生物合成如 β-内-类、万古等完全不敏感，并且通常对多粘菌素、-和类具有耐药性。相反，四环素类和大环内酯类对支原体的抑制作用很强，而-糖苷类和氯的抑制作用较弱。