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dna连接酶主要用于产生新的-分子组合，及在将其连接到载体上

这三个连续的步骤在连接酶的三个不同域进行，与双链dna接触的各个域环绕dna底物形成反应域。dna连接酶主要用于产生新的-分子组合，以及在分子克1隆前将其连接到载体上。

用于分子克1隆的dna连接酶是-来源或者噬菌体编码。所有真-，无论是嗜热或嗜温，包含一个单一的连接酶基因，编码nad*-依赖型的酶(olivera&lehman1967; takahashi et al. 1984)。

在连接反应的第yi步中， 使用nad的二磷酸作为磷酸1酐键和腺营基团转移到dna连接酶赖氨酸残基的ε--基团。腺苷酸残基然后转移到dna底物的5--基末端，变得易于受到并列的3-基团的亲核攻击。

这导致磷酸二酯键的形成，消去amp,以及形成dna链的共价连接。用于分子克1隆的dna连接酶在连接非-底物时能力有所不同，如平末端双链、dna-rna杂交体或单链dna.这些以及其他的属性归纳于表5。分子克1隆中比较常用的催化体外连接的酶是t4噬菌体编码的dna连接酶。

dna 连接酶是生物体内重要的酶，其所催化的反应在dna的copy和修复过程中起着重要的作用。dna连接酶分为两大类:一类是利用atp 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖atp的dna 连接酶，另一类是利用烟-腺piao呤二核苷酸(nad+) 的能量催化两个核苷酸链之间形成磷酸二酯键的依赖nad* 的dna 连接酶。

dna连接酶dna ligase也称dna黏合酶，在分子生物学中扮演一个既特殊又关键的角色，那就是连接dna链3-oh末端和，另一dna链的5-p末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的dna链连成完整的链。连接酶的催化作用需要消耗atp。

t4 rna ligase主要用于rna和rna之间的连接，连接时需要5磷酸基团和3-的存在。不仅可以进行rna分子间的连接，也可以进行rna分子(zui短8个碱基)的环化连接。

t4 rna ligase可以用于rna和单核苷酸之间的连接，单核苷酸必须为5和3均磷酸化的形式，此时常用于rna的3末端标记。

t4 rna ligase也可以用于dna和rna之间的连接。当dna提供5磷酸基团，rna提供3-时，连接效率较高；当dna提供3-，rna提供5磷酸基团时，连接效率非常低。

t4 rna ligase也可以用于dna和dna之间的连接，但连接效率非常低。主要用于dna的环化连接，例如5 race中的cdna环化。dna和dna之间的连接尽管可以进行，但比较困难。