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低温生物知多少？

实验室的传代保藏过程

1. 按说明书要求复溶菌粉，转种于适当的增菌培养基内g1，复壮后转接至平板上，并于适当温度下培养适当时间，分离出单个纯种菌落，此为第2代g2。

2. 鉴定完成后，挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，同时挑取纯菌落转接斜面作为工作用。此时，保藏为第2代，但工作用则为第三代。

3. 将第2代管冷冻保存，将工作用于适当温度下培养适当时间后可用于试验。

4. 取一支冷冻保存的g2代转种于平板和斜面培养基上，平板上的制成冷冻保藏管第三代g3，斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用w3。

5. 将第三代g3冷冻或低温保存，将生长、转种后的g2经灭菌处理后丢弃。

6. 当工作用代数小于5时，可直接用上一代工作用转接下一代工作用，如w3可直接转接为w4。

7. 按上述程序操作，直至g4转为w5为止，需重新开启安瓿，再重复上述操作程序、保藏和使用。

以上方法中，被分为两类。传代用和工作用，传代用用于甘油冷冻管法保藏，工作用用斜面低温保藏法保藏。

实验证明，甘油冷冻管的有效期至少为2年，但其主要适用于-需氧、酵母菌的传代、保藏、-和芽孢类-则需应用其它方法。

低温生物菌种的主要作用是什么呢？

增进土壤肥力

这是微生物肥料的主要作用之一。例如各种自生、联合或共生的固氮微生物肥料，可以增加土壤中的氮素含量；多种溶磷、解钾的微生物，如芽孢菌、假单胞菌的应用，可以将土壤中难溶的磷、钾分解出来，转变为作物能吸收利用的磷、钾化合物，使作物生长环境中的营养元素供应增加。一些微生物肥料的应用，增加了土壤中的有机质，提高了土壤的肥力。

低温生物菌种——常用菌种介绍

-芽孢菌

-芽孢菌(bacillus megaterium de bary，1884)：杆状，末端圆，单个或呈-排列。1.2-1.5×2.0-4.0微米，严格好氧，能运动，革兰氏阳性，芽孢1.0-1.2×1.5-2.0微米，椭圆形，中生或次端生 。芽孢从椭圆形到长形不等；不能生成-；菌株能运动，但运动缓慢，需要游离氧；发酵-产酸；dna的g+c含量为36%-38%。 

接触酶阳性；水解淀粉和酪素；v-p反应和卵黄反应阴性。琼脂平板微波状，平隆，浅黄白色转浅灰白色至浅灰褐色，表面略有光泽，在马铃薯块上生长，由浅黄灰色变为灰色。液化明胶慢、胨化牛奶、水解淀粉。 

工业上用于生产-异构酶，-芽孢菌在回收贵重金属方面有着重要作用，还能降解土壤中难溶的含磷化合物，使之成为作物能吸收的可溶物-芽孢菌与球形芽孢菌混合培养时具有固氮增效作用，非常适合制成微生物肥料。 

-芽孢菌作为一种重要解磷-被广泛应用于农业生产中，将其优化培养制成菌剂肥料使用，可以提高土壤肥质，增产增收。近年来，随着微生物肥料在农业上的广泛应用，-芽孢菌以其在土壤中的解磷作用而被深入研究，是工业上生产解磷固钾肥的常用菌种，同时在水体处理和提高-发酵增香效果上有-的作用。 

-芽孢菌能降解有机磷药和曲霉。张广志等人从长期受有机磷药污染的土壤中分离出3株能降解-和芽孢菌，其中2株为-芽孢菌。孙丰芹发现-芽孢菌trs-3对曲霉afb1有去除作用，其发酵上清液降解afb1的能力达到78.55%。