低背景PCR酶服务介绍「友名生物」

pcr扩增的基本原理

基本原理：pcr技术的基本原理类似于dna的天然copy过程，其特-依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。dna的半保留复1制是生物进化和传代的重要途径。双链dna在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在dna聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则copy成同样的两分子拷贝。

在实验中发现，dna在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制dna的变性和复性，加入设计引物，dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的体外复1制。

出现的pcr扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。

引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行pcr扩增时，扩增出的pcr产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。

靶序列或扩增产物的交叉污染：这种污染有两种原因：一是整个基因组或大片段的交叉污染，导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决：操作时应小心轻柔，防止将靶序列吸入加样内或溅出离心管外。除酶及不-高温的物质外，所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及样进头等均应-使用。-时，在加标本前，反应管和试剂用紫外线照射，以破坏存在的-。二是空气中的小片段-污染，这些小片段比靶序列短，但有一定的同源性。可互相拼接，与引物互补后，可扩增出pcr产物，而导致假阳性的产生，可用巢式pcr方法来减轻或消除。

低严格单链特-引物pcr (lowstringencysingle specific primer pcr, lssp- pgr)技术

lssp - pcr是建立在pcr基础上的又一种新型基因突变检测技术。要求是“二高一低”。高浓度的单链引物( 5-端/ 3-端引物均可).约4. 8lmol高浓度的taq酶( 16lmol/ 100ml) 低退火温度( 300.所用的模板必须是纯化的dna部分片段。在这种低严格条件下。引物与模板间发生不同程度的错配。形成多种大小不同的扩增产物。经电泳分离后形成不同的带型。对同一目的基因而言。所形成的带型是固定的。因而称之为“基因标签”。这是一种检测基因突变或进行遗传鉴定的快速敏感方法。