ELISA试剂盒-「英国BIORBYT中国办事处」

完整的elisa试剂盒包含以下各组分：

(1)已包被抗原或抗体的固相载体；

(2)酶标记的抗原或抗体(结合物)；

(3)酶的底物；

(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)；

(5)结合物及标本的稀释液；

(6)洗涤液，在板式elisa中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；

(7)酶反应终止液，常用的hrp反应终止液为-，其浓度按加量及比色液的体积而异，在板式elisa中一般采用3mol/l。

该试剂盒的原理是基于夹心酶联immune-sorbent测定技术。 捕获抗体预包被到 96 孔板上。 并以生物素偶联抗体作为检测抗体。

随后将标准品、测试样品和生物素偶联检测抗体加入孔中，并且用洗涤缓冲液洗涤。 加入 hrp-链霉亲和素，用洗涤缓冲液。 tmb 底物用于观察 hrp 酶促反应。 hrp 催化 tmb产生蓝色产物，加入酸性终止液后变为黄色。 黄色密度与板中捕获的目标样品量成正比。 阅读microplate reader o.d. 450nm 处的吸光度，然后可以计算目标的浓度。

elisa实验中，恰当的洗涤步骤对于减少由于未结合的偶联抗体引起的背景信号是-的，所以正确的洗涤步骤有助于增加分析的信噪比和-单一特-结合。

-洗涤液体积足够多，以除去孔中游离的抗原或抗体的痕迹，从而减少不需要的背景信号。

保持孔底和洗涤端之间的建议距离，以减少残留的抗体/抗原液体，从而影响信号。浮动头更灵活，更容易获得完整的清洗。重复循环洗涤以-除去不需要的抗原和抗体，但已结合的抗体会保留在结合原位。

biorbyt建议在每次孵育后进行三次洗涤。根据您所使用的板子是出厂包被还是您自己包被的，可以对洗涤方式进行调整，如果是您自己包被的板子，您可能需要增加清洗次数。

如果您在结果中注意到“钩状效应”，可能的原因是分析物不-与样品中抗原的量结合。这个问题也可以通过首先在一系列稀释度下进行预实验测试来解决。如果您发现结果灵敏度较低，则需要检查：

- 试剂盒保存是否正确

- 检测试剂是否充分发挥作用

- 您的样品类型和缓冲液是否兼容

- 靶蛋白和底物浓度/数量是否是足够的

- 读板器的吸附波长设置是否正确

- 记录时间是否足够长

- 您的elisa试剂盒对您的测定是否具有正确的灵敏度。