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无细胞系统是利用细胞提取物而不是细胞进行基因转录和翻译的系统。一个无细胞基因表达系统主要包括三个部分：细胞提取物，反应混合液，以及-模板

1.细胞提取物：从细胞中提取的物质，主要包含核糖体、rna聚合酶、其他转录和翻译蛋白比如σ因子、起始因子和延伸因子，以及用于能量代谢的酶和辅因子。在有些菌株的提取物中，可能抑制了蛋白酶和-酶的活性。

2.反应混合液：包含蛋白质合成所需的一些原料，如---酸、核苷酸、盐离子如铵盐、镁、钾、能源糖类、磷酸肌酸等、拥挤试剂crowding agents、代谢辅因子辅酶a、nad、缓冲液、trna以及其他代谢添加剂等。

3.-模板：可以是质粒dna或pcr产物线装dna，浓度通常在1-20 nm。

无细胞系统一般的反应体积为10微升，但是根据其实际应用，反应体系可以从10(-15)到103变化。在开始反应时，将三种组分在16-37℃下孵育，蛋白质合成将在1-24h内进行。

目前，传统的获得多基因转基yin植株的方法包括共转化，再转化w及杂交。但是运 些传统方法的缺点是共转化的两个或多个基因的转化效率是不可控的，每个基因在目标基因组的插入位置也是不一样的，而基因分离会导致不稳定的遗传后代。另外再转化w及杂 交都是耗时的过程。

而为了克服运些缺点，具有单个或者多个转录盒子的多基因载体应运而生并成功 应用于多个研究，但是运些多基因表达载体的应用没有得到广泛的推广应用。因为大部分 的方法需要亚克1隆w至于克1隆所耗时间拉长;没有标签或者报告基因与目标基因相连，运 样就导致蛋白或者基因的鉴定比较困难；另外，某些方法如采用同尾酶构建多基因载体的方法受限于可用的酶的数量不多运个问题。所w构建多基因载体需要根据研究目的而设计。

蛋白表达系统

蛋白表达系统是指由宿主、外源基因、载体和辅助成分组成的体系。通过这个体系可以实现外源基因在宿主中表达的目的。一般由以下几个部分组成：

1、宿主。表达蛋白的生物体。可以为---、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同，适合表达蛋白的种类也不相同。

2、载体。载体的种类与宿主相匹配。根据宿主不同，分为原核---表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、哺乳动物表达载体、昆虫表达载体等。载体中含有外源基因片段。通过载体介导，外源基因可以在宿主中表达。

3、辅助成分。有的表达系统中还包括了协助载体进入宿主的辅助成分。比如昆虫-杆状---表达体系中的杆状---。