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96UV结晶板公司-「博亚捷晶」
2. 蛋白质溶解于合适的溶剂中，从中它能通过一种盐或有机化合物而析出。溶剂通常是水-缓冲剂溶液，有时加，如2--2，4-mpd。正常情况下，沉淀剂也被加入，但是浓度不高于使沉淀产生。对于不溶于水-缓冲剂或水-的膜蛋白，还需要加入去污剂。
3. 使溶液过饱和。在这一步中，小---体形成，它是晶体生长所需的核。对小分子的结晶来说，相比于蛋白质更为人熟知，晶核的自发形成需要提供表面张力能。一旦这个能障被突破了，晶体开始生长。能障在高水平的过饱和度时很容易克服。因此，在高过饱和度时，晶核更易自发形成。晶核的形成可作为一个过饱和度和其他参数的函数通过多种方法来研究，包括光散射、荧光去极化及电子显微镜。
4. 一旦晶核形成，晶体生长正式开始。对低分子量的化合物而言，新分子会逐步结合到正在生长的晶体表面。这是由于这些位置的结合能比较大，相对于分子结合到平滑的表面。这些步骤要么由晶系缺陷造成，要么发生在表面随机形成的晶核。
获得晶体及提高晶体是蛋白质结晶方法学中的两大基本问题.为解决这两个问题,结构生物学家已发展了许多方法,其中针对蛋白质本身进行分子改造是非常重要的方法之一.通过蛋白质工程技术,如突变,还原化修饰,剪切或删除构象柔性环区,融合蛋白,复合物共结晶,原位蛋白质水解等方法对蛋白质本身进行分子改造,可明显提高其结晶成功率及晶体.随着该方面成功案例的不断积累,分子改造技术越来越---出其在蛋白质结构解析中的重要作用,---是对一些难以结晶或提高晶体的蛋白质而言,其应用价值更不可忽视.针对近年来分子改造技术在蛋白质结晶中的应用进行了回顾与总结,并展望了其未来的发展。
半胱氨酸、赖氨酸的蛋白质、以及含有金属离子的蛋白质。这些蛋白质的吸附会导致重组蛋白质纯度大幅降低。为了解决这一问题,我们制备了两类新材料,用于提高重组蛋白质纯度:1)通过分子印迹技术,以组氨酸标签为模板,在imac材料表面形成组氨酸标签的分子印迹层,使得不含组氨酸标签的蛋白质无法靠近imac材料,从而提高重组蛋白纯度;2)通过活性可控自由基聚合,在imac基质材料表面包被了一层尺寸可控的聚合物涂层。在聚合物网络的筛分作用下,进而实现带组氨酸标签的重组蛋白的纯化。
尽管近些年来在蛋白质结晶的理论、方法和技术上已取得---发展,获得衍射---的蛋白质晶体仍然是利用x-射线解析蛋白质结构的一个主要瓶颈问题。这里我们发展了一种新型的蛋白质结晶方法—固液界面方法,即slim。该方法主要包括两个部分1)预先加入并干燥蛋白质母液;2)进行晶体生长的时候,直接将蛋白质溶液加入干母液中,从而产生一个固体(干母液)和液体(蛋白质溶液)的界面。该方法不仅操作简单、快速,而且降低了对蛋白质溶液浓度的要求。
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