DN-段化承诺守信「友名生物」

dna连接酶主要用于产生新的-分子组合，及在将其连接到载体上

这三个连续的步骤在连接酶的三个不同域进行，与双链dna接触的各个域环绕dna底物形成反应域。dna连接酶主要用于产生新的-分子组合，以及在分子克1隆前将其连接到载体上。

用于分子克1隆的dna连接酶是---来源或者噬菌体编码。所有真---，无论是嗜热或嗜温，包含一个单一的连接酶基因，编码nad*-依赖型的酶(olivera&lehman1967; takahashi et al. 1984)。

在连接反应的第yi步中， 使用nad的二磷酸作为磷酸1酐键和腺营基团转移到dna连接酶赖氨酸残基的ε----基团。腺苷酸残基然后转移到dna底物的5----基末端，变得易于受到并列的3---基团的亲核攻击。

这导致磷酸二酯键的形成，消去amp,以及形成dna链的共价连接。用于分子克1隆的dna连接酶在连接非---底物时能力有所不同，如平末端双链、dna-rna杂交体或单链dna.这些以及其他的属性归纳于表5。分子克1隆中比较常用的催化体外连接的酶是t4噬菌体编码的dna连接酶。

dna连接酶的性质

大肠杆1菌的dna连接酶是一条分子量为75ku的多肽链。对胰蛋白酶敏感，可被其水解。水解后形成的小片段仍具有部份活性，可以催化酶与nad(而不是atp)反应形成酶-amp中间物，但不能继续将amp转移到dna上促进磷酸二酯键的形成。dna连接酶在大肠杆1菌细胞中约有300个分子，和dna聚合酶ⅰ的分子数相近，这也是比较合理的现象。因为dna连接酶的主要功能就是在dna聚合酶ⅰ催化聚合，填满双链dna上的单链间隙后封闭dna双链上的缺口。这在dna copy、修复和重组中起着重要的作用，连接酶有缺陷的突变株不能进行dna copy、修复和重组。

dna新链的延伸由dna聚合酶 iii所催化。为了copy的不断进行，解旋酶须沿着模板前进, 边移动边解开双链。由于dna的解链，在dna双链区势必产生正超螺旋，在环状dna中更为明显，当达到一定程度后就可能造成copy叉难以再继续前进，但在细胞内dna的copy不会因出现拓扑学问题而停止，因为拓扑异构酶会解决这一问题。

随着引发体合成rna引物，dna聚合酶 iii开始不断地将引物延伸，合成dna。dna聚合酶 iii是一个多亚基复合二聚体，一个单体用于前导链的合成，另一个单体用于滞后链的合成，因此它可以在同一时间分别copydna前导链和滞后链。虽然dna前导链和滞后链copy的方向不同，但如果滞后链模板环绕dna聚合酶iii,并通过dna聚合酶 iii,然后再折向未解链的双链dna的方向，则滞后链的合成可以和前导链的合成在同一方向进行。