支原体检测「多图」

选择素elisa试剂盒的实验原理

选择素elisa试剂盒是一类异亲型结合、ca2+依赖的细胞粘着分子，能与特异糖基识别并结合。主要参与白细胞与血管内皮细胞之间的识别与粘着。

实验原理：

将目标包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入品或标本，其中的目标连接于固相载体上的结合，然后加入微生物化的目标，将未结合的生物素洗净后，加入hrp标记和亲和素，再次洗涤后加入tmb底物显色。tmb在-化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶1标仪在450nm波长下测定吸光度o.d.值，计算样品浓度。

精密度：精密度用样品测定值的变异系数cv表示。cv%=sd/mean×100

批内差：取同批次选择素elisa试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及sd值。

批间差：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及sd值。

批内差： cv<10% inter-批间差： cv<13%

经测定，试剂盒在x期内按温度保存，其活性率小于5%。为减小外部因素对试剂盒前后检测值的影响，实验室的条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可人为误差。

选择素elisa试剂盒识别的配体都是一些寡糖基团，迄今为止发现的配体都是一些具有唾液酸化路易斯寡糖(s-le，siaglyl-lewis)或类似结构的分子。一种寡糖基团可以存在多种糖蛋白和糖脂分子上，并分布于多种细胞表面，因此选择素分子配体在体内分布较为广泛。

dna提取过程中各种试剂的作用及原理

溶液iii--3mol/l naac(ph4.8)溶液：

　　naac的水溶液呈碱性，为了调节ph至4.8，必须加入大量的冰-。 所以该溶液实际上是naac-hac的缓冲液。用ph4.8的naac溶液是为了把ph12.6的抽提液，调回ph至中性， 使变性的质粒dna能够复性，并能稳定存在。而高盐的3mol/l naac有利于变性的大分子染色体dna、 rna以及sds-蛋白复合物凝聚而沉淀之。前者是因为中和-上的电荷，减少相斥力而互相聚合.

提取dna常用的方法

　　一.酚抽提法：先用蛋酶k、sds破碎细胞，-蛋白，然后用酚和酚-氯dna大小为100-150kb

　　二.-胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度-胺解聚蛋白质与dna的结合，再透析获得dna可得dna200kb左右。

　　三.玻璃棒缠绕法：用-胍裂解细胞，将裂解物铺于-上，然后用带钩或u型玻璃棒在界面轻搅，dna沉淀液绕于玻棒。生成dna约80kb。

　　四.-1醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积-1醇替代-，可去除小分子rna(在-1醇中可溶状态)

　　五.表面活性剂快速制备法：用triton x-100a或np40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶k或酚去除蛋白，-沉淀或透析。

　　六.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于pcr反应。

　　七.碱变性快速制备：先用naoh作用20分钟，再加hci中和，离心后取上清，含少量dna。

--提取就像针尖上跳舞

检验的首要一步是--提取，这也是zui危险的一步，需要在专门的生物安全二级实验室里进行。检测人员要在清洁区穿戴两套防护服、两副乳胶手套，戴护目镜，穿靴套，前后穿过6道门，才能到达-实验区，--提取就像是“针尖上的舞蹈”。“每次脱下防护服，衣服都湿透了。在2—4个小时的--提取实验过程中，一般都会安排两人一组进行检验，既是规定要求，也是防止工作人员在密闭的负压实验空间里出现意外。