多重PCR扩增择优「友名生物」

hot start pcr的原理

hot start pcr法是提高pcr特-的重要方法之一。这种方法可以防止在pcr反应第yi步骤因引物的错配或引物二聚体的形成而导致的非特-扩增，从而可以提高目的dna部分片段的扩增效率。takara taq hot start version，takara ex taq hot start version，takara la taq hot start version，primestar hs dna polymerase，mightyamp dna polymerase是抗1体和dna聚合酶的混合制品。抗1体在高温加热前与聚合酶相结合，抑制聚合酶的活性。在pcr反应zui初的dna变性步骤，抗1体变性，聚合酶活性恢复。

等位基因特-pcr(allele- specificpcr. aspcr技术

aspcr依赖于引物3”-端的一个碱基错配,不仅减少多聚酶的延伸效率,而且降低引物-模板复合物的热稳定性。这样有点突变的模板进行pcr扩增后检测不到扩增产物.可用于检测基因点突变。

单链构型多态性pcr(single- strandconformational polymorphism pcr, sscppcr)技术

sscp- pcr是根据形成不同构象的等长dna单链在中性聚丙1烯-凝胶中的电泳迁移率变化来检测基因变异。在不含变性剂的中性聚丙1烯-凝胶中,单链dna迁移率除与dna长度有关外,更主要取决于dna单链所形成的空间构象。相同长度的单链dna因其顺序不同或单个碱基差异所形成的构象就会不同，pcr产物经变性后进行单链dna凝胶电泳时，每条单链处于一定的位置.靶dna中若发生碱基缺失、插入或单个碱基置换时.就会出现泳动变位。从而提示该片段有基因变异存在。

梯度pcr仪

把-pcr扩增可以设置一系列不同的退火温度条件温度梯度，通常12钟温度梯度，这样的仪器就叫梯度pcr仪。

工作模式和原理同普通pcr仪一样，它出了又普通pcr仪的功能外还多了一个梯度退火功能。dna部分片段的扩增对温度的控制精度要求-高，不同的dna部分片段其退火温度不一样，通过计算dna部分片段中的cg碱基的含量只能初步的判断出zui优退火温度在+5℃范围内，如果用普通pcr仪进行研究，需重复扩增很多次，然后做电泳进行分析来确定zui优退火温度。而梯度pcr仪则只需要一次就可以完成，在节省了时间的同时提高了实验的-性和准确性。主要用于研究未知dna退火温度的扩增，这样节约成本的同时也节约了时间和经费。在不设置梯度的情况下，梯度pcr仪也可以做普通pcr扩增。

该仪器主要应用于科研，教学机构，医学-研究，-院校，-分析，-等。