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细胞冻存

细胞密度达到80%～90%时，去培养基，10ml pbs清洗2次。加入3ml含0.25%edta的胰蛋白酶，放人细胞培养箱3min。加入lmldmem完全培养基终止胰酶-，转移至15ml离心管。加入10ml pbs清洗细胞培养盘，转移至15ml离心管，2000rpmx2min，弃上清液。

加入lml冻存液90%血1清，10%dmso，放入冻存盒内盒内有-1醇，以-温度降低的速度，立即放入一80℃冰箱内，过夜，第二天放入液氮中，可以保存至少两年，如不放人液氮，可以保存三个月。

冻存液的配制：70%的完全培养基+20%fbs+10%dmso.dmso要慢慢滴加，边滴边摇。

经过了近十多年既漫长又短暂的发展，ips细胞技术已经取得了-的进展。一个个突破性的成果既给我们带来了喜悦，也带来了新的挑战，细胞重编程有望迎来一个新的研究浪潮。尽管ips细胞有着-的应用前景，然而，未来ips细胞的研究也面临着许多亟需解决的问题：

首先，效率问题。目前，-产生ips细胞的率仍然很低，这与基因导人的方式整合位点、表观遗传学等多种因素有关。这已成为制约ips从实验室走向-的zui大瓶颈。因此，如何提高ips细胞的制备效率仍是人们普遍关注的问题。

第二，安全性问题。现在-ips细胞通常借助逆转录-为载体，将几种癌基因转入分化细胞-其成为ips细胞，而这种方法就有可能会因为外源基因插入细胞基因组，干扰了内源基因的表达，从而诱发cancer。