RNA干扰载体「在线咨询」

基于基因工程技术制备小分子特-antibody

通过大量的实验发现，小分子的偶联物并不是不能产生特-针对小分子的抗1体，而是效价过低，不满足制备多克1隆抗1体和单克1隆抗1体的需要，但是基因工程手段为制备该类型小分子特-antibody提供了新的思路。该技术的-在于制备antibody的基因-，通过噬菌体展示技术、核糖体展示技术等获取antibody的目的基因，再利用蛋白表达系统制备重组antibody或者改造antibody，以获取针对小分子的特-antibody。目前随着antibody基因测序信息的公布和完善，为人工设计antibody提供了基础，这也会以后小分子特-antibody的制备提供了新的途径。

植物ｄｎａ的ｓｄｓ提取法：1 取2-3ｇ新鲜叶片,在液氮中研磨成粉状(防止溶化)后转入15ｍｌ离心管中。2 加入5ｍｌ于65℃预热的提取缓冲液,65℃水浴保温30ｍｉｎ(摇动数次),使提取液与样品充分混合。3 加入2ｍｌ5ｍｏｌ/ｌｋａｃ,剧烈振荡,冰浴保温20ｍｉｎ以上。4 2700×ｇ离心20ｍｉｎ,将上清液倒入新的15ｍｌ离心管中,(若提取ｄｎａ用于ｓｏｕｔｈｅｒｎ等实验,一般在转移上清时加滤膜,防止样品残渣混入,可-ｄｎａ纯度)。5 加入4ｍｌ氯1仿/异戊1醇(24∶1),摇匀,平衡,2700×ｇ离心15ｍｉｎ。6 在另一新的15ｍｌ离心管中加入5ｍｌ预冷的-1醇,将上清液用移液枪转入此管,在-20℃冷却30ｍｉｎ以上。7 2700×ｇ离心10ｍｉｎ,弃去上清液,用4ｍｌ70%-洗涤,室温保持10ｍｉｎ。2700×ｇ离心3ｍｉｎ,倒去上清液。8 重复步骤7,用4ｍｌ70%-洗涤,室温保持10ｍｉｎ。2700×ｇ离心3ｍｉｎ,倒去上清液。超净工作台内吹干(3ｈ左右)。9 加1ｍｌｔｅ缓冲液中溶解,加10μｌｒｎａｓｅ(10ｍｇ/ｍｌ),在37℃恒温箱中温育20ｍｉｎ。10 再加100μｌ3ｍｏｌ/ｌｎａａｃ和2ｍｌ无水-,2700×ｇ离心3ｍｉｎ,倒去上清液。超净工作台内吹干(3ｈ左右)。11 将ｄｎａ沉淀溶于150μｌｔｅ中,置于超净工作台内(3ｈ左右)。将ｔｅ溶液转入已灭菌的1 5ｍｌｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中,-20℃保存备用。

dna提取过程中各种试剂的作用及原理

溶液iii--3mol/l naac(ph4.8)溶液：

　　naac的水溶液呈碱性，为了调节ph至4.8，必须加入大量的冰-。 所以该溶液实际上是naac-hac的缓冲液。用ph4.8的naac溶液是为了把ph12.6的抽提液，调回ph至中性， 使变性的质粒dna能够复性，并能稳定存在。而高盐的3mol/l naac有利于变性的大分子染色体dna、 rna以及sds-蛋白复合物凝聚而沉淀之。前者是因为中和-上的电荷，减少相斥力而互相聚合.