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选择素elisa试剂盒的实验原理

选择素elisa试剂盒是一类异亲型结合、ca2+依赖的细胞粘着分子，能与特异糖基识别并结合。主要参与白细胞与血管内皮细胞之间的识别与粘着。

实验原理：

将目标包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入品或标本，其中的目标连接于固相载体上的结合，然后加入微生物化的目标，将未结合的生物素洗净后，加入hrp标记和亲和素，再次洗涤后加入tmb底物显色。tmb在---化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶1标仪在450nm波长下测定吸光度o.d.值，计算样品浓度。

精密度：精密度用样品测定值的变异系数cv表示。cv%=sd/mean×100

批内差：取同批次选择素elisa试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及sd值。

批间差：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及sd值。

批内差： cv<10% inter-批间差： cv<13%

经测定，试剂盒在x期内按温度保存，其活性率小于5%。为减小外部因素对试剂盒前后检测值的影响，实验室的条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可人为误差。

选择素elisa试剂盒识别的配体都是一些寡糖基团，迄今为止发现的配体都是一些具有唾液酸化路易斯寡糖(s-le，siaglyl-lewis)或类似结构的分子。一种寡糖基团可以存在多种糖蛋白和糖脂分子上，并分布于多种细胞表面，因此选择素分子配体在体内分布较为广泛。

dna提取试剂盒是根据氯化芐法构建的，能够从样本中提取基因组dna的试剂盒。氯化1苄具有能将含有纤维素等的细胞壁中的------化，从而破坏细胞壁的特性。本制品利用了氯化1苄的这一特性，将植物样品---融解后，再使用pipet tip的尖1端将植物样品在microtube壁上数次按压即可破坏细胞壁。本法与传统方法相比，省去了液氮研磨等烦琐步骤，有利于---处理大量样品。而且，本制品经过了改良，热处理时间只需15分钟，使用本制品从实验开始至水相回收只需30分钟时间。得到的基因组dna可以进行pcr扩增及---酶处理等。

dna提取试剂盒主要可以分为以下几大类：小量全血基因组dna提取试剂盒、中量全血基因组dna提取试剂盒、组织/细胞基因组dna提取试剂盒、中量/大量组织/细胞基因组dna提取试剂盒、全血/组织/细胞基因组dna提取试剂盒、ctab植物基因dna提取试剂盒、新型植物基因组dna提取试剂盒、酵母基因组dna提取试剂盒、m13噬菌体单链基因组dna提取试剂盒。

从动物组织中提取基因组dna

使用研钵进行匀浆时：

取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的研钵中，快速用力展研成匀浆。注下列组织请加液氮研磨至粉末状。

a．富含dna酶的胰脏、脾1脏、胸腺、淋巴等组织。

b．富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。

c．富含角质蛋白的组织或坚硬的组织如骨骼等。

加入650 μl的solution a和0.9 μl的rnase a1，温和研磨30秒钟。注使用上述-注的实验材料时，请在加入solution a及rnase a1后，将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。

收集650 μl研磨好的组织匀浆液移至collection tube中。如果匀浆体积不足650 μl，请补充solution a至650 μl，65℃保温5分钟。

使用研磨棒进行匀浆时:

取1～100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的collection tube 中，用研磨棒快速研磨成糊状。

加入350 μl的solution a和0.9 μl的rnase a1后用研磨棒快速研磨成匀浆。

加入350 μl的solution a将研磨棒上的匀浆冲入collection tube中，充分振荡混合后，65℃保温5分钟。

鼻-的采集

被采集人员需要 保持头部不动，采样人员去除鼻腔内壁的分泌物。然后采样人员一手轻扶被采集人员头部，一手将鼻-缓缓插入鼻腔至鼻咽部。在鼻咽部，拭子将停留数秒吸取分泌物，而后采样人员轻轻旋转取出拭子，将样本保存并送检。

-的采集

被采集人员先用 生理盐水漱口，采样人员将拭子放入无菌生理盐水中湿润。被采集人员头部微仰并保持不动，嘴张大，并发“啊”音，露出两侧咽扁桃体，采集人员将拭子越过舌根，在被采集者两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少3次，然后再在咽后壁上下擦拭至少3次。

需要注意的是，两种采集方法， 被采集人员均会稍感不适，所以在采样的过程中，被采集人员需稍稍克服一下不适感， 配合采样人员的工作。不可过度活动头部，以免拭子划伤粘膜。如被采集人员发生---性-，采集过程需稍作暂停。