化学试剂的纯度对检测结果的准确性有较大的影响,但是试剂纯度越高,其价格也越贵。所以应该根据检测任务,检测方法以及对检测结果准确度的要求选用不同规格的试剂。化学试剂选用的原则是在满足检测要求的前提下,选择试剂的级别应尽可能低,既不要-别而造成浪费,也不能随意降低试剂级别而降低检测结果的准确度。对痕量检测应选高纯度规格的试剂,以降低空白值,对于仲裁检测一般选用优级纯和检测纯试剂。
在全自动-仪使用中,我们发现一个项目会影响紧随其后项目的测试结果,造成这种影响的原因之一是一种实际中含有另一试验的测定物质而直接干扰其测试结果。比如:在tp试剂中含有大量的cuso4,如果将cu放在tp项目的后面检测,会使检测结果偏高或重复性差。再如p放在含有磷酸盐的项目后面,tba放在含有胆酸盐的项目后面都会使检测结果偏高或重复性差。
3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合实验实验步骤:
1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的buphtm磷酸盐缓冲液中,并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液如tris或者甘氨酸,可以通过在pbs中透析或浓缩的方法除去。计算:蛋白mg/蛋白分子量mw=蛋白质的毫摩尔数。
2. 在打开之前,平衡生物素至室温。加2 mg sulfo-nhs-biotin于100 ul 超纯水中,加入足够量浓度的生物素,一般对于10 mg/ml 蛋白来说超过12倍分子数,对于2 mg/ml 蛋白溶液应超过20倍,或者该试剂也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中
3. 室温30分钟,或冰上放置2小时。
4. 用30 ml pbs预洗纯化柱,上样,加入与欲收集量相同的缓冲液,收集0.5 ml 或1 ml 于单独的管中。
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