粗提物扩增酶信息「友名生物」

pcr反应特点

灵敏度高：pcr产物的生成量是以指数方式增加的，能将皮克(pg=10-12量级的起始待测模板扩增到微克μg=-6水平。能从100万个细胞中检出一个靶1细胞；在---的检测中，pcr的灵敏度可达3个rfu(空斑形成单位；在---学中zui小检出率为3个---。

简便、快速：pcr反应用耐高温的taq dna聚合酶，---地将反应液加好后，即在dna扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应，一般在2～4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析，不一定要用同位素，无放1射性污染、易推广。

纯度要求低：不需要分离---或---及培养细胞，dna 粗制品及rna均可作为扩增模板。可直接用---标本如---、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等dna扩增检测。

巢式pcr(nest pcr枝术.

先用一对靶序列的外引物扩增以提高模板量.然后再用一对内引物扩增以得到特异的pcr带。此为巢式pcr。若用一条外引物作内引物则称之为半巢式pcr。为减少 巢式pcr的操作步骤可将外引物设计得比内引物长些，且用量较少。同时在第yi次pcr时采用较高的退火温度而第二次采用较低的退火温度。这样在第yi次pcr时，由于较高退火温度下内引物不能与模板结合,故只有外引物扩增产物，经过若干次循环。待外引物基本消耗尽，无需取出第yi次pcr产物，只需降低退火即可直接进行pcr扩增。这不仅减少操作步骤。同时也降低了交叉污染的机会。这种pcr称中途进退式pcr( drop-in, drop-out pcr)上述三种方法主要用于少量dna模板的扩增。

原位pcr仪

它是由主机，加热模块，玻片，热盖，控制软件组成。主要是应用对细胞或组织内的dna部分片段进行原位扩增分析-即定位分析，如病源基因在细胞的位置或目的基因在细胞内的作用位置等。是保持细胞或组织的完整性，使pcr反应体系渗透到组织和细胞中，在细胞的靶dna所在的位置上进行基因扩增，不但可以检测到靶dna，又能标出靶序列在细胞内的位置，于分子和细胞水平上研究---的发病机理和---过程及病理的转变有重大的实用价值。它无需将细胞破碎提取dna，细胞内有dna酶的作用扩增受到一定的影响，使用不是很普遍。

该仪器主要应用于医学---研究，如癌细胞等。

目前的------试剂盒，多数采用荧光定量pcr方法，通过检测荧光信号的累积来确定样本中是否含有----。那么，---到底需要经过哪些步骤呢？概括起来，是 取样、留样、保存、-提取和上机检测五个步骤。

取样

采集人体的分泌物。用鼻-或-擦拭鼻腔或咽后壁及双侧扁桃体处

留样

将拭子头浸入细胞保存液中，折断尾部后立即旋紧管盖

保存

将样本管放入密封袋中保存好，并及时送检

-提取

将样本送进实验室进行-提取

上机检测

将提取物进行荧光pcr扩增反应