RAB4A ANTIBODY价格合理「武汉纽斯特」

试剂准备

?1x测定/裂解缓冲液：短暂混合5x储备液，并在去离子水中稀释至1x。 在使用前，添加蛋白酶抑制l剂，例如1 mm pmsf，10 μg / ml亮肽素和10 μg / ml抑肽酶。

1.将细胞一块10厘米长的平板，约107个细胞培养至约80-90％汇合。根据需要用活化剂或抑制l剂---细胞。

2.吸出培养基，并用冰冷的pbs洗涤两次。

3.完全除去pbs洗涤液，然后向细胞中加入冰冷的1x分析/裂解缓冲液每10 cm组织培养板0.5-1 ml。

4.将培养板放在冰上10-20分钟。

5.用刮板将其从平板上取下。

6.将裂解物转移至适当大小的试管中，并置于冰上。

7.如果发生核裂解，则细胞裂解液可能变得非常粘稠，难以移液。如果发生这种情况，可将裂解液通过27?号注l射器针头3-4次以剪切基因组dna。

8.通过离心10分钟在4°c下为12,000 x g清除裂解物。

9.收集上清液并将样品约1-2 mg的总蛋白存储在冰上以立即使用，或速冻并存储在-70°c以便将来使用。

 1.抗活性的arl1，小鼠单克l隆抗l体货号26924：一小瓶–溶于ph 7.4的pbs中的22 μl1mg / ml，含有50％甘油和0.05％---l化钠。该抗l体特---识别所有脊椎动物的arl1-gtp。

2.蛋白a / g琼脂糖目录号30301：一小瓶– 400 μl 50％浆液。

3. 5x测定/裂解缓冲液目录号30302：一瓶– 30 ml的250 mm tris-hcl，ph 8，750mm nacl，50 mm mgcl2，5 mm edta，5％triton x-100。

4.抗arl1，小鼠单克l隆抗l体目录号26056：一小瓶– 100 μl1 mg / ml

ph 7.4的pbs中含有50％的甘油。

5. 100 xgtpγs货号30303：1瓶– 100 μl，10 mm，使用5 μlgtpγsgtp标记的0.5 ml细胞裂解物。

6. 100 x gdp产品目录号30304：一个样品瓶– 100 μl，100 mm，使用5 μl gdp

gdp标记的0.5 ml细胞裂解物。

1.---的和非---的细胞裂解液

2.蛋白酶抑制l剂

3. 4°c管摇杆或摇床

4. 0.5 m edta，ph8.0

5. 1 m氯---

6. 2倍还原sds-page样品缓冲液

7.电泳和免l疫印迹系统

8.免l疫印迹洗涤缓冲液，例如tbst10 mm tris-hcl，ph 7.4，0.15 m nacl，0.05％tween-20

9.免l疫印迹封闭缓冲液tbst包含5％脱脂奶粉或3％bsa

10. pvdf或硝l酸纤维素膜

11.二抗

12. ecl检测试剂

gtpases的rab家族调节真核水泡膜运输。 rab35与两个血浆

膜和内体定位，并涉及到包括t细胞受体回收，卵母细胞卵黄蛋白回收和胞质分裂在内的各种过程。 rab35调节神经元样细胞中的神经突生长，并可以-突起。

当前没有直接测定法来测量rab35 gtpases的活化。

neweast biosciences rab35激l活检测试剂盒基于特定于配置的单克l隆

特---识别rab35 gtp而不识别rab rab35 gdp的抗l体。鉴于...的高度亲和力

抗原的单克l隆抗l体，可以在短时间内进行激l活测定。这个

分析提供了---的结果，并具有一致的可重复性。

这些抗rab35 gtp单克l隆抗l体也可以用于监测大鼠rab35的激l活。

1细胞和组织中的免l疫组织化学。

neweast biosciences rab35激l活检测试剂盒提供了一种简单快速的方法来监测

rab35的激l活。每个试剂盒均提供足够的量以执行20个测定。

电泳和转移

1向聚丙l烯---凝胶17%中加入15μl/孔的下拉上清液。而且建议包括预染色mw标准作为成功转入的指标步骤3。

2按照制造商的说明进行sds-page。

3按照制造商的说明，将凝胶蛋白转移到pvdf或硝化纤维膜上说明。

免l疫印迹检测所有步骤均在室温下搅拌

1在电印迹步骤之后，将pvdf膜浸入100%甲l醇中15次

然后在室温下干燥5分钟。

如果使用---纤维素，则应跳过此步骤。

2室温下用5%脱脂奶粉或3%牛血l清白蛋白在tbst中封闭1小时

不断地搅动。

用抗arl1单克l隆抗l体孵育，新鲜稀释1:50~1000

取决于样品中arl1蛋白质的含量5%脱脂奶粉或3%

bsa/tbst，室温下持续搅拌1-2小时或4o

过夜。

3用tbst清洗吸水膜三次，每次5分钟。

4用二级抗l体例如山羊抗鼠igg，hrp结合物培养膜，

在室温下，在5%脱脂奶粉或3%bsa/tbst中新鲜稀释1:1000，1小时

5用tbst清洗吸水膜三次，每次5分钟。

6使用您选择的检测方法，如ecl。