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农bacillus转化法
农bacillus包括引起植物冠瘿瘤的根癌农bacillus和引起发根病的发根农杆1菌。根癌农杆1菌和发根农bacillus有相似的遗传背景。在农bacillus介导的转化中,80%左右是由根癌农bacillus介导的,大约20%是由发根农bacillus介导的。这里主要介绍根癌农杆1菌介导的转化。
根癌农bacillusti质粒上有一段转移dnat-dna和vir区,在农bacillus侵染植物时,这段t-dna可以插入到植物基因组中,使其携带的基因在植物中得以表达。vir区共24个基因,它们表达的蛋白与t-dna的加工和转移有关。
真核细胞同源重组法
1994 年,graham f建立了在293细胞同源重组产生重组腺-的方法。这个方法需要2个质粒:骨架质粒含有腺-绝大部分基因组序列,但不含有包装信号;穿梭质粒含有itr、包装信号和目的基因克1隆位点,以及两段与骨架质粒有重叠的序列。将目的基因克1隆到穿梭质粒,与骨架质粒共转染293细胞,由于这两个质粒的部分序列有重叠,能够在细胞内发生同源重组,zui终产生完整的载体基因组,并包装出重组-颗粒。该方法曾经被广泛使用,推动了腺-载体的发展。由于细胞内重组效率低,某些重组事件还可能产生可copy-(rcv),必需经过噬斑纯化才能获得正确的克1隆化的重组-,费时费力,正逐渐被其他方法替代。
基因有两个特点:一是能忠实地自己,以保持生物的基本特征;二是在繁衍后代上,基因能够“突变”和变异,当受精卵或母体受到环境或遗传的影响,后代的基因组会发生有害缺陷或突变。绝大多数产生-,在特定的环境下有的会发生遗传。也称遗传病。在正常的条件下,生命会在遗传的基础上发生变异,这些变异是正常的变异。基因的与表达含特定遗传信息的核苷酸序列,是遗传物质的小功能单位。除某些-的基因由核糖-rna构成以外,多数生物的基因由脱氧核糖-dna构成,并在染色体上作线状排列。基因一词通常指染色体基因。在真核生物中,由于染色体在细胞核内,所以又称为核基因。位于线粒体和叶绿体等细胞器中的基因则称为染色体外基因、核外基因或细胞质基因,也可以分别称为线粒体基因、质粒和叶绿体基因
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