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{微生物检测}微生物分离纯化

含有一种以上的微生物培养物称为混和培养物(mixed culture)。如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养(pureculture)。培养1、根据培养时是否需要氧气，可分为好氧培养和厌氧培养两大类。在进行junzhong鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称为分离纯化，方法有许多种。

1、倾注平板法

首先把微生物悬液通过一系列稀释，取一定量的稀释液与熔化好的保持在40-50℃左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养。如果要分离一些专性寄生菌，就必须把样品接种到相应敏感宿主细胞群体中，使其大量生长。单一细胞经过多次增殖后形成一个菌落，取单个菌落制成悬液，重复上述步骤数次，便可得到纯培养物。

2、涂布平板法

首先把微生物悬液通过适当的稀释，取一定量的稀释液放在无菌的已经凝固的营养琼脂平板上，然后用无菌的玻璃guadao把稀释液均匀地涂布在培养基表面上，经恒温培养便可以得到单个菌落。

3、平板划线法

zui简单的分离微生物的方法是平板划线法。用无菌的接种环取培养物少许在平板上进行划线。食品微生物(foodmicroorganisms)是与食品有关的微生物的总称。划线的方法很多，常见的比较容易出现单个菌落的划线方法有斜线法、曲线法、方格法、fangshe法、四格法等。当接种环在培养基表面上往后移动时，接种环上的菌液逐渐稀释，后在所划的线-散着单个细胞，经培养，每一个细胞长成一个菌落。

-效力

适用性检查 取大肠埃希菌、金黄色球菌、铜绿假单胞菌各50～100cfu,分别注入无菌平皿中，立即倾注胰酪胨大豆琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；检验结果以1g、1ml、10g、10ml、10c㎡为单位报告，特殊品种可以xiao包装单位报告。取白色nian珠菌、黑曲霉各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注沙氏-琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计数；同时，用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

黑曲霉菌悬液：操作时关闭空调系统及洁净工作台风机。食源病原微生物可通过接触物表面、水、土壤、空气、排泄物、食物等媒介传播，从而污染“从农田到餐桌”的食物链任何环节。接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏-琼脂培养基中，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05%ml/ml聚山梨酯80的0.9%无菌-溶液，将孢子洗脱，然后，用适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05%ml/ml聚山梨酯80的0.9%无菌-溶液稀释至           ，用比浊法制成每1ml含孢子数108cfu的孢子悬液。

微生物限度检查

4需用特殊方法制备供试液的供试品

  膜剂供试品 取供试品，剪碎，加ph7.0无菌--蛋白胨缓冲液，或ph7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基，浸泡，振摇，制成1：10的供试液。若需要，调节供试液ph值至6～8。-时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。

  肠溶及结肠溶制剂供试品 取供试品，加入ph6.8无菌磷酸盐缓冲液用于肠溶制剂或ph7.6 无菌磷酸盐缓冲液用于结肠溶制剂，置45℃水浴中，振摇，使溶解，制成1：10的供试液。-时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。

  气雾剂、-供试品 取供试品，置-20℃或其他适宜温度冷冻约1小时，取出，迅速消毒供试品开启部位，用无菌钢锥在该部位钻一小孔，放至室温，并轻轻转动容器，使抛射剂缓缓全部释出。供试品亦可采用其他适宜的方法取出。(1)接种灭菌(2)开启棉塞(3)管口灭菌(4)挑起菌苔(5)接种(6)塞好棉塞。用无菌zhu射器从每一容器中吸出药液于无菌容器中混合，然后取样检查。

  贴膏剂供试品 取供试品，去掉防粘层，将粘贴面朝上放置在无菌玻璃或塑料器皿上，在粘贴面上覆盖一层适宜的无菌多孔材料如无菌纱布，避免贴膏剂粘贴在一起。将处理后的贴膏剂放入盛有适宜体积并含有表面活性剂如聚山梨酯80或卵磷脂稀释液的容器中，振荡至少30分钟。5、涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。-时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。