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福建酶联ELISA试剂盒公司服务「中检维康」
1.包被：用0.05mph9.牰碳酸盐包被缓冲液将稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。简称洗涤，下同。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。同时-白孔，阴性对照孔及阳性对照孔。
3. 加酶标：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标经滴定后的稀释度0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4. 加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的tmb底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5. 终止反应：于各反应孔中加入2m-0.05ml。
6. 结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测od值：在elisa检测仪上，于450nm若以abts显色，则410nm处，以空白对照孔调零后测各孔od值，若大于规定的阴性对照od值的2.1倍，即为阳性。
检测抗体及酶结合物的稀释度合适(均为1:30), 方便试验操作者准确地做稀释工作，-实验结果的重复性。
1. 加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低。
a.原因：未加入酶标记物。
解决办法：请按照操作步骤进行。
b.原因：试剂盒内容物未能充分回。
解决办法：确定试剂盒内容物回温后再进行操作。
c.原因：室温太低。
解决办法：若室温太低(<19℃)，请于操作步骤4，适当延长温育时间。
d.原因：未使用试剂盒的清洗液清洗。
解决办法： 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗。
e.原因：试剂盒已过有效期限。
解决办法：请更换成仍在有效期限内的试剂盒。
吸光值均偏高(或线性不够陡)。
a.原因：室温太高(>;25℃)。
解决办法： 若无法降低室内温度，请适当缩短步骤4的温育时间。
b.原因：底物溶液受到污染。
解决办法： 若发现底物溶液已呈现淡蓝色，请不要再使用。
c.原因：反应时间超过太久。
解决办法：请控制反应时间。
d.原因：酶标记物污染了盒内其它试剂。
解决办法：使用过的吸头应立即丢弃，可避免试剂间相互污染，凡是试剂(-是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡，再以清水冲洗干净，可-无残留)
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