原位杂交电话「多图」

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的-公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、日化产品生产平台；原位杂交是指用特定探针定位、检测dna、rna的一种有效的实验方法，通过把特点序列到特殊载体上，通过转录酶反转一条天然的rna探针，将探针和切片样品进行杂交，通过一系列显色方法，来确定rna或者dna表达区域。可以开展各类动、植物、---、细胞等生物实验。

在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼0.75ml，使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。

武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年，是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的-公司；公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、日化产品生产平台；收集斑马鱼的胚胎，在holfretor水中培养，到达所需要的发育时期时，用蛋白酶去除卵膜，用4%---固定，在4℃保存，二十四小时后用50%2%---溶液洗，然后换成，在-20c保存，待用两天和两天以上的胚胎需要用处理，去除色素。可以开展各类动、植物、---、细胞等生物实验。

用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤1。 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定dna。 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。它利用荧光标记的-片段为探针，与染色体上或dna显微切片上的特异fl-n：~行杂交，通过荧光检测系统(荧光显微镜)检测信号dna序列在染色体或dna显微切片上的目的dna序列，进而确定其杂交位点。

fish选用的标本既可以是分裂细胞也可以是间期细胞。近年来，随着fish所应用的探针种类的不断增多，如dapi /gfp/fitc/pi/texas-red等，使得普通的宽场荧光显微镜即可获得高的fish信号。若采用多种方法标记dna探针，故一次杂交可以同时观察多个探针的信号，使用数字成像系统ccd/cmos，分别多次摄取的信号储存在计算机内，通过软件系统的处理，终形成一个复合的多颜色的图像。

显色以下各步均在室温下进行。

1缓冲液i洗1min。

2用含2%正常羊和0.3％tritonx-100的缓冲液i孵育切片30min。

3用含1％正常羊和0.3％tronx-100的缓冲液i稀释羊抗dig。

4将稀释液滴加在切片上，封口膜覆盖，湿盒内4℃孵育过夜。

5缓冲液i洗10min。

6缓冲液ⅱ洗10min。

7加显色液，封口膜覆盖，避光室温孵育2～20h，---镜检，当显色满意时入缓冲液ⅲ终止显色。

显色液临用前配，其配方为：nbt 45μl；x-phospllate液 35μl；左旋咪唑      2.4mg；缓冲液ⅱ 加至10ml。

8常规脱水、透明、封固。

结果：杂交阳性信号为紫蓝色颗粒。