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分光光度计的工作原理

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分光光度计采用一个可以产生多个波长的光源，通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源，光线透过测试的样品后，部分光线被吸收，计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度。样品的吸光值与样品的浓度成正比。

单色光辐射穿过被测物质溶液时，被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度光路长度成正比，其关系如下式：

a=-lg(i/i0)=-lgt=klc

式中 :a 为吸光度；

i0为入射的单色光强度；

i 为透射的单色光强度；

t 为物质的透射率；

k 为摩尔吸收系数；

l 为被分析物质的光程，即比色皿的边长；

c 为物质的浓度；

分光光度计的操作方法

1.接通电源，打开仪器开关，掀开样品室暗箱盖，预热10分钟。

2.将灵敏度开关调至“1”档若零点调节器调不到“0”时，需选用较高的档。

3.根据所需波长转动波长选择钮。

4.将空白液及测定液分别倒入比色杯3/4处，用擦镜纸擦清外壁，放入样品室内，使空白管对准光路。

5.在暗箱盖开启状态下调节零点调节器，使读数盘指针指向t=0处。

6.盖上暗箱盖，调节“100”调节器，使空白管的t=100，指针稳定后逐步拉出样品滑竿，分别读出测定管的光密度值，并记录。

7.比色完毕，关上电源，取出比色皿洗净，样品室用软布或软纸擦净。

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分光光度计的维护方法

1)若大幅度改变测试波长，需稍等片刻，等灯热平衡后，重新校正“0”和“”点。然后再测量。

2)指针式仪器在未接通电源时，电表的指针必须位于零刻度上。若不是这种情况，需进行机械调零。

3)比色皿使用完毕后，请立即用蒸馏水冲洗干净，并用干净柔软的纱布将水迹擦去，以防止表面光洁度被破坏，影响比色皿的透光率。

4)操作人员不应轻易动灯泡及反光镜灯，以免影响光效率。

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