ARF3 ANTIBODY服务「多图」

 1.抗活性的arl1，小鼠单克l隆抗l体货号26924：一小瓶–溶于ph 7.4的pbs中的22 μl1mg / ml，含有50％甘油和0.05％-l化钠。该抗l体特-识别所有脊椎动物的arl1-gtp。

2.蛋白a / g琼脂糖目录号30301：一小瓶– 400 μl 50％浆液。

3. 5x测定/裂解缓冲液目录号30302：一瓶– 30 ml的250 mm tris-hcl，ph 8，750mm nacl，50 mm mgcl2，5 mm edta，5％triton x-100。

4.抗arl1，小鼠单克l隆抗l体目录号26056：一小瓶– 100 μl1 mg / ml

ph 7.4的pbs中含有50％的甘油。

5. 100 xgtpγs货号30303：1瓶– 100 μl，10 mm，使用5 μlgtpγsgtp标记的0.5 ml细胞裂解物。

6. 100 x gdp产品目录号30304：一个样品瓶– 100 μl，100 mm，使用5 μl gdp

gdp标记的0.5 ml细胞裂解物。

1.-的和非-的细胞裂解液

2.蛋白酶抑制l剂

3. 4°c管摇杆或摇床

4. 0.5 m edta，ph8.0

5. 1 m氯-

6. 2倍还原sds-page样品缓冲液

7.电泳和免l疫印迹系统

8.免l疫印迹洗涤缓冲液，例如tbst10 mm tris-hcl，ph 7.4，0.15 m nacl，0.05％tween-20

9.免l疫印迹封闭缓冲液tbst包含5％脱脂奶粉或3％bsa

10. pvdf或硝l酸纤维素膜

11.二抗

12. ecl检测试剂

?1x测定/裂解缓冲液：短暂混合5x储备液，并在去离子水中稀释至1x。 在使用前，添加蛋白酶抑制l剂，例如1 mm pmsf，10 μg / ml亮肽素和10 μg / ml抑肽酶。

检测原理

    武汉纽斯特生物技术有限公司的cdc42活性检测试剂盒主要是利用识别蛋白特异形态的cdc42-gtp单克l隆抗l体特-的去检测细胞提取物或者体外的样品需要进行gtpγs活化处理活性cdc42-gtp的水平。简言之，特-识别cdc42活化构象的鼠单克l隆抗l体可以特-结合细胞裂解液中的cdc42-gtp活性蛋白，然后利用protein a/g将抗原抗l体的结合物吸附下来，再利用特-识别cdc42活化构象的兔多克l隆抗l体进行免l疫印迹分析进行检测。

体外用gtpγs/gdp处理蛋白以用作阳性和阴性的对照

注意：在细胞体内环境条件下大约有10%的cdc42被激l活，而在体外用gtpγs处理大约有90%的cdc42被激l活。

1. 准备两个离心管，每个管中各加入0.5 ml的细胞提取物如果是纯的cdc42蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug。

2. 每个管中加入20ul 0.5m edta(终浓度即为20 mm)。

3. 一个管中加入5ul的100x gtpγs终浓度即为100 um作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100x gdp终浓度即为1 mm作为阴性对照。

4. 将离心管置于30°c条件下反应30min并不断搅动。

5. 终止反应：将管置于冰上并加入32.5ul 1m mgcl2(终浓度即为60mm)。