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2014年左右,我在新加坡任教,遇到了许多从事各种项目研究的不同团体。就是在这里,我知道了其它牌子的质谱仪,目击了别人使用 sciex仪器来进行他们的研究,并取得了很多成果。回到香港后,我决定将这种技术重新进行下去,并继续我的蛋白质组研究。
根据我在新加坡的观察和感受,我知道 sciex的质谱系统适用于对i眼i科不同蛋白的研究。此外,我还与使用质谱系统的其他大学和实验室进行了交流,很多人称赞香港的 sciex团队,这使我相信,这家公司不仅提供质谱系统,而且还提供持续的技术支持。鉴于我之前使用其它质谱分析仪的经验,这一点对我很重要,至后我选择了 sciex的 tripletof?6600和 qtrap?6500+系统。
很多实验室自己不使用质谱仪,而是把样品送到核i心设备平台进行测试。但是,由于设备比较繁忙,一般仪器使用者都是按标准程序去采集样品,-不能满足特定样品类型的实验需要,在一定程度上-了其研究工作。通过使用我们实验室的质谱仪,我发现研究结果深入和具有-性。与研究蛋白质组学和近视问题的其他出版物相比。有了 sciex技术的支持,我们就能从质谱系统中获得理想的实验结果。我们在各地有很多合作,并经常将各种样品送到我们手中。为了进一步开展蛋白质组学研究,我发现 sciex质谱系统功能-,非常直观,而且很容易操作。实验组的每个人都喜欢和 sciex团队一起工作,这对我很重要。在整合了 sciexcloud (云计算)的 oneomics?项目后,我们也从中获益,从而简化了数据的分析和共享。
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蛋白组学在-机制阐述、快速诊断、医学等领域有着广阔的应用前景,但目前大多数蛋白质组学方法都是面向小范围、低通量的科研型应用方法。面临着这种瓶颈, 有个和他的同事们正在利用 sciex至近发布的 scanningswath采集技术来解决这个问题。
该是生物代谢组学领域的人物之一,目前在德国柏林夏里-学医学院生物化学研究所和英国伦敦弗朗西斯·克里克研究所代谢分子生物学实验室工作。该团队致力于细胞稳态及其对外界-的反应机制的研究,旨在进一步阐明代谢途径的机制和寻找潜在的药靶点。它们和 sciex保持了长期的合作关系,利用 sciex质谱仪对大队列样品进行了蛋白质定量。这个解释说:“我们需要监控蛋白质表达和测蛋白翻译后修饰的细微变化,但在我们的研究中,这要求我们定量非常别的样本,这是一个传统的蛋白质组实验室很难的规模。多年来,我们的团队一直与 sciex紧密合作,致力于寻找-的方法来发展高通量蛋白质分析新策略。同样,通过与 sciex的合作,我们可以很幸运地接触到一系列令人兴奋的和应用程序。至新的技术是 scanningswath采集模式,它已经被证明是一种非常适合在高通量蛋白质组学中使用的方法。
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高i效液相色谱仪是分析实验室中常用的检测仪器之一,应用日益广泛。这种仪器在使用过程中,不可避免地会出现各种问题,其检测结果的准确度直接影响仪器正常工作。操作人员若能了解故障的原因,就能清楚预防和排除这些故障的方法,正确使用仪器,使仪器性能达到至大化。下面我们将从以下几个方面与你分享使用高i效液相色谱仪时需要注意的一些问题。
试管的使用问题。
1、试管是否清洁。高i效液相色谱分析是一种灵敏的分析方法,若采用不洁净试管,将会影响检测结果的准确性。举例来说,当用作为溶剂溶解样品时,所用的小试管是用橡胶塞盖的,因此,在每一样样品中,都存在着一定保留时间的干扰峰,经证实,该干扰峰是由浸入橡胶塞而溶下的组分所产生的干扰峰存在。
2、塑料试管的溶解。近几年,-塑料试管为试验人员带来了很大的方便。然而,在使用过程中必须注意有机溶i剂对试管的溶解现象,当用这种试管提取样品时,有些有机溶i剂(如等)会溶解在管壁上,这些物质有时也会在检测器上产生信号,从而干扰样品测定。此时,可以先用同样的实验条件测试一下,看看提取液是否会在检测器上产生干扰信号,如果确实存在干扰信号,则只需更换耐有机溶i剂玻璃试管。
3、试管壁对样品的吸附问题。此外,还应注意这一问题,否则也会影响检测结果的准确性,在监测(therapeutic drug monitoring, tdm)中,一些被测如、丙咪-等易吸附在玻璃试管的管壁上,因此,操作中宜采用聚管,以0.5%的已二胺已烷液作为提取剂,可有效防止吸附。
高i效液相色谱通常由输注系统(泵)、进样系统、分离系统(柱)、检测系统、数据处理系统组成。以下简要说明各部分:
1、输注系统(高压泵)及其重要性。
高电压泵是其中的关键部件,根据原理可分为两大类:一为恒流泵,一为恒压泵。不管色谱柱的阻力如何变化,不管外界如何影响恒流泵,它所输出的流动相的流速可以基本保持不变,这正好是 高i效液相色谱系统工作的基本要求;而恒压泵所输出的基本压力是恒流的,在正常情况下,恒压可以达到恒流的效果。但由于色谱柱、温度等可能发生变化,因此可能导致流量变化, 高i效液相色谱用户不希望看到这种情况。因此通常来说,恒流泵比恒压泵好(用过的横流泵多于用恒压泵)。高电压水泵的直接影响到整个 高i效液相色谱的,是用户关心的核i
(1)耐高压。
耐压性是 高i效液相色谱系统对高压泵的基本要求之一,其平均粒径约4微米左右,在5 mm左右的色谱柱中,在流动相速度为1-3 ml/min时,需要达到34.47-41.36 mpa (5000-6000 psi)。但是,随着填料粒径的不断减小,压液相色谱柱要求耐压能力较高,粒径为1-2.5μ m的无孔色谱填料的应用得到推广,从而使流动相在色谱柱中的阻力增大。现在市场上已经有达到68.94 mpa (10000 psi)的高压恒流泵(例如: altex 100 a)。
(2)稳定,低波动。
输注高压泵的稳定性和脉动的大小直接影响 高i效液相色谱系统的稳定性(漂移和重复性)、影响系统的噪声、降低灵敏度,尤其是 高i效液相色谱系统采用电化学检测器、示差检测、梯度分离等检测器,以及梯度分离等,因此目前国际上许多高压泵的压力脉动都可以控制在1%以内。
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