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原位杂交是指将特定标记的已知顺序-为探针与细胞或组织切片中-进行杂交，从而对特定-顺序进行精3确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

原位杂交技术(in situ hybridization，ish)是分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术，始于20世纪60年代。

原位pcr；原位杂交细胞定位和pcr的高灵敏度相结合的技术，在细胞爬片、甩片或涂片或组织石蜡、冰冻切片上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。

原位杂交试验

收集斑马鱼的胚胎，在holfretor水中培养，到达所需要的发育时期时，用蛋白酶去除卵膜，用4%-固定，在4℃保存，二十四小时后用50%甲6醇2%-溶液洗，然后换成甲9醇，在-20c 保存，待用(两天和两天以上的胚胎需要用双氧6水处理，去除色素。或者使用-锍脲稀溶液培养，可阻断色素的形成)

杂交技术zui重要的因素之一是选择zui适的杂交反应温度。若反应温度低于tm 10～15℃，碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链，错配对减少。若反应温度再低tm-30℃，虽然互补链之间也可形成稳定的双链，但互补碱基配对减少，错配对增多、氢键结合的更弱。如两个同源性在50%左右或-些的dna，调整杂交温度可使它们之间的杂交率变化10倍，因此在实验前必须首先确定杂交温度。通常有三种温度可供试验，即zui适复性温度、苛刻复性温度及非苛刻复性温度。温度的选择及温度对杂交的影响见表18-3。

zui适复性温度optimunm renaturation temperature, tor：tor =tm –25℃

苛刻复性温度：ts = tm – (10或15℃)

非苛刻复性温度：tns =tm – (30或35℃)