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冻存袋的基本原理

利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。 细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%．15%的甘油或dmso，可使溶液冰点降低，加之在缓慢---条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。 采用慢冻快融的方法能较好地---细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内(-196℃)。

细胞冻存步骤

1.用移液器吸走原培养基，加入适量pbs洗1-2遍;

2.加入适量胰酶，置于培养箱中---;

3.待------后加入适量血浆或完全培养基终止---，800-1000rpm离心3-5min;

4.配制冻存液，待细胞离心后去上清，加入冻存液重悬，调整细胞浓度为3×106~1×107 cells/ml，转移到冻存管中;

5.将冻存管放入程序降温盒中，-80度过夜，然后转移到液氮中保存。

6.冻存细胞后应取出一管复苏，检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存，

为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养，观察细胞生长情况，再继续冻存

使用冻存袋的注意事项

1、使用冻存袋储存样本时，严格要求应把冻存袋放入液氮的气相层或冰箱中保存！如果冻存袋储存于液氮液体中，液氮有一定几率会渗入冻存袋内部，复苏时液氮气化导致管内外压力不平衡，这样极易造成冻存管的炸裂，并具有生物危害性。

2、冻存的样本量不要超过冻存袋要求的大工作体积。

3、用毕暂时不再使用时，应洗净并擦净活栓，在活栓处应垫一纸条，以防粘连。