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基因枪转化法

气动式基因枪中具有代表性的是pds-1000/he，利用由不同厚度的聚---四---亚1胺膜制成的可裂圆片来调控---气压力。当---气压力达到可裂圆片的临界承受压力时，可裂圆片破1裂并产生---的气流，使微弹载体携带微弹高速运动，遇到刚性的阻挡网，微弹载体被阻遏，而微弹利用惯性继续向前高速运动，轰击靶1细胞或组织，从而携带外源基因进入细胞内。基因枪法不再受到受体基因型的---，又能避开原生质体再生的障碍，从而使植物的遗传转化翻开了新的一页。

基因枪转化法在植物遗传转化中的应用：应用基因枪法转化zui早的是klein等人在1987年将携带有---氯霉1素---转移酶cat基因的烟1草花叶---的rna导入洋葱的表皮细胞，使此基因得到表达。后来，随着对物理参数如金属粒子的理化特性、dna与金属粒子的结合和靶组织特性等、环境条件如受体植株、外植体和靶组织所适宜的温度、湿度和光照等和生物因子如外植体及其轰击前后的培养条件等等的技术优化，不断完善的基因枪转化技术能实现对许多受体材料的转化，包括原生质体、悬浮细胞系、愈伤组织、外植体幼穗、幼胚或成熟胚，甚至可以直接轰击转化花粉。

脂质体法

　　是用带正电荷的脂质体作载体携带外源基因，与带负电荷的细胞膜融合，把外源基因导入细胞。用脂质体法转化原生质体，其毒性较电1击法和peg法小，且适于运输大分子dna穿过质膜。

　　antonelli等1990用该法将基因组dna转入bms玉米原生质体，获得转化了的再生愈伤组织，转化率---8%。

　　脂质体法的优点是转化受体为单个细胞，易于筛选，不易形成嵌合体，对于原生质体再生能力好的植物品种，是---的转化方法。

第yi代腺---载体：一般将e1或e3基因缺失的腺---载体称为第yi代腺---载体，此类型载体在未经过纯化时可引发机体产生较强的炎1症反应和免1疫反应，纯化后可以安全使用，体内表达周期可达4周。

第二代腺---载体：e2a或e4基因缺失的腺---载体被称为第二代腺---载体，产生的免1疫反应较弱其载体容量和安全性方面有所改进，但---包装难度和出毒和---滴度下降厉害，应用相---限。

第三代腺---载体：第三代载体缺失了全部的无---载体，gutless vector或大部分腺---基因微型腺---载体，mini ad，仅可保留itr和包装信号序列。第三代腺---载体zui大可插入35kb的基因，---蛋白表达引起的细胞免1疫反应进一步减少，载体中引入核基质附着区基因可使得外源基因保持长期表达，并增加了载体的稳定性。这一载体系统需要一个腺---突变体作为辅助---。

腺---传播特点

宿主范围广对人致病性低，腺---载体系统可广泛用于人类及非人类蛋白的表达。腺---可感1染一系列哺乳动物细胞，因此在大多哺乳动物细胞和组织中均可用来表达重组蛋白。---需要-的是：腺---具有嗜上皮细胞性，而人类的大多数的肿1瘤就是上皮细胞来源的。另外，腺---的copy基因和致病基因均已相当清楚，在人群中早已流行70-80%---体内都有腺---的中和抗1体存在。人类感1野1生型腺---后仅产生轻微的自限性---，且---唑cure有效。