含基因组DNA去除试剂盒-「友名生物」

pcr的创建

khorana (1971)等zui早提出-体外扩增的设想：“经dna变性，与合适的引物杂交，用dna聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可合成trna基因。”但由于当时基因序列分析方法尚未成熟，热稳定dna聚合酶尚未---以及引物合成的困难，这种想法似乎没有实际意义。加---子克1隆技术的出现提供了一种克1隆和扩增基因的途径，所以khorana的设想被人们遗忘了。

1983年4月的一个星期五晚上，他开车去乡下别墅的路上,猛然闪现出“多聚酶链式反应”的想法。

1983年12月，mullis用同位素标记法看到了10个循环后的49 bp长度的第yi个pcr片段；

1985年，kary mullis在cetus公司工作期间，发明了pcr。mullis要合成dna引物来进行测序工作，却常为没有足够多的模板dna而烦恼。

1985年10月25日申请了pcr的专1利，

1987年7月28---准专1利号4,683,202 ，mullis是第yi个发明人；

1985年12月20日在science杂志上发表了第yi篇pcr的学术论1文，mullis是共同作者；

1986年5月，mullis在冷泉港实验室做专题报告，全从此开始学习pcr的方法。

pcr循环参数

预变性模板dna完全变性与pcr酶的完全激1活对pcr能否成功---，建议加热时间参考试剂说明书，一般未修饰的taq酶激1活时间为两分钟。 

变性步骤：循环中一般95℃，30秒---使各种靶dna序列完全变性，可能的情况下可缩短该步骤时间。变性时间过长损害酶活性，过短靶序列变性不，易造成扩增失败。 

引物退火：退火温度需要从多方面去决定，一般根据引物的tm值为参考，根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。退火温度对pcr的特---有较大影响。

引物延伸：引物延伸一般在72℃进行taq酶zui适温度。但在扩增长度较短且退火温度较高时，本步骤可省略延伸时间随扩增片段长短而定，一般在1000bp以上，含pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。

循环数：大多数pcr含25-35循环，过多易产生非特异扩增。

zui后延伸在zui后一个循环后，反应在72℃维持10-30分钟．使引物延伸完全，并使单链产物退火成双链。

pcr法不仅仅局限于分子生物学，还因其简便、迅速等特点被广泛应用于医学、---学、食品、环境卫生检验、动植物检验等其它领域。taq dna聚合酶是pcr法普遍使用的聚合酶，但其具有如下局限性。

1. 度 (fidelity)：通常taq dna polymerase的fidelity并不高，pcr反应有时会出现错配 (misincorporation) 现象，因而pcr克1隆、变异导入等实验中，需加以注意。

2. 扩增的dna长度：使用taq dna polymerase进行pcr扩增时，通常可扩增几kb的dna，超过10 kb则比较困难。这就给利用pcr进行mapping等genome解析带来麻烦。

3. 扩增量：使用taq dna polymerase进行pcr产物克1隆及食品、环境卫生检验等时，扩增量常常达不到要求。为解决以上难题，takara在对polymerase、buffer及反应条件等进行深入研究的基础上，开发了la pcr (long&accurate pcr) 技术，运用此技术可大量正确地扩增长达40 kb 的dna部分片段。la pcr技术扩展了pcr的应用范围，可在genome解析、基因诊断、长片段 dna的克1隆及变异导入等方面发挥优势。

复合pcr(multiplex pcr)技术

在同一反应中用多组引物同时扩增几种基因片段.如果基因的某一区段有缺失则相应的电泳谱上这一区带就会消失。复合pcr主要用于同一病原体的分型及同时检测多种病原体、多个点突变的分子病的诊断。

重组pcr技术

重组pcr技术是在两个pcr扩增体系中,两对引物分别由其中之一在其5°-端和3-端引物上带.上一段互补的序列混合两种pcr扩增产物.经变性和复性。两组pcr产物互补序列发生粘连。其中一条重组杂合链能在pcr条件下发生聚合延伸反应，产生一个包含两个不同基因的杂合基因。