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染色体原位杂交电话 武汉思特进公司
发布者：武汉思特进科技发展有限公司 时间：2022-1-6
原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行-特-检测，与免6疫组化技术的结合应用，能将dna、mrna和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。1969年pardue和gall将放9射性标记的探针直接应用于纯化-的杂交，此后得益于分子克6隆技术的发展，及不同探针标记系统和检测系统的应用，-增加了原位杂交检测的应用灵活性和检测灵敏度。
在条件都得到满足的情况下，杂交的成败就取决于保温时间。时间短了，杂交反应不完成；时间长了也无益，会引起非特异结合增多。一般杂交反应要进行20h左右。1966年britten和kohne用cot =值来计算杂交反应时间。cot 值实际上是杂交液中单链起始浓度co和 反应时间t的乘积。实验表明cot =100时，杂交反应基本完成。cot=0，基本上没有杂交。例如在液相杂交中未标记的dna 400μg/ml按单股dna每微克 紫外吸收值为0.024计算，总的吸收值为 9.6，如果反应时间为21h，那么对于未标记的dna来说，cot =9.6/21 =100.8,，杂交完成了。对标记dn a浓度为0.1μg/ml来说cot值为0.05，这就充分排除了标记dna的自我复性。tm值25℃时杂交zui佳，所以首先要根据公式4计算杂交体tm 值。由此式可见，通过调节盐浓度、-胺浓度和杂交温度来控制所需的严格性。
杂交技术zui重要的因素之一是选择zui适的杂交反应温度。若反应温度低于tm 10～15℃，碱基顺序高度同源的互补链可形成稳定的双链，错配对减少。若反应温度再低tm-30℃，虽然互补链之间也可形成稳定的双链，但互补碱基配对减少，错配对增多、氢键结合的更弱。如两个同源性在50%左右或-些的dna，调整杂交温度可使它们之间的杂交率变化10倍，因此在实验前必须首先确定杂交温度。通常有三种温度可供试验，即zui适复性温度、苛刻复性温度及非苛刻复性温度。温度的选择及温度对杂交的影响见表18-3。
zui适复性温度optimunm renaturation temperature, tor：tor =tm –25℃
苛刻复性温度：ts = tm – (10或15℃)
非苛刻复性温度：tns =tm – (30或35℃)
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