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发布者：武汉思特进科技发展有限公司时间：2022-1-7

多彩色荧光原位杂交技术多彩色荧光原位杂交(multicolor fluorescence in situ hybridization，mfish)是在荧光原位杂交技术的基础上发展起来的一种新技术，它用几种不同颜色的荧光素单独或混合标记的探针进行原位杂交，能同时检测多个靶位，各靶位在荧光显微镜下和照片上的颜色不同，呈现多种色彩，因而被称为多彩色荧光原位杂交。它克服了fish技术的局限，能同时检测多个基因，在检测遗传物质的突变和染色体上基因定位等方面得到了广泛的应用(杨明杰等1998)。

原位杂交中探针的选择

dna探针、rna探针和寡核苷酸探针均能通过不同的酶促分子反应进行标记。寡核苷酸探针的长度较短，因此避免了探针内部退火的问题，在杂交时的渗透能力也---，探针与靶标的接触这是影响原位杂交是否成功的重要因素之一。dna探针、rna探针在合成时需要控制探针片段长度，通常300-1000bp左右，能覆盖到较长片段的靶-序列，增加检测的灵敏度。

杂交流程

杂交液的成分主要影响了-杂交的复性动力学和热稳定性。杂交液的基础成分为：denhardts溶液ficoll，bsa，pvp，异源-如鲱精3子dna/trna/竞争dna，磷酸钠，edta，sds，盐离子，---胺和---葡聚糖，以及杂交探针。不同的应用中进行杂交温度、ph、盐离子、---胺、探针浓度等条件的优化。常用的ph范围为6.5~7.5，较高的ph值有助于提高杂交的严谨性。

惰性多聚体可用来促进250个碱基以上的探针的杂交率。对单链探针可增加3倍，而对双链探针、随机剪切或随机引物标记的探针可增加---100倍。而短探针不需用促进剂，因其复杂度低和分子量小，短探针本身的杂交率就高。---葡聚糖是一种广泛用于较长双链探针杂交的促进剂。这是一种多聚胺，平均分子量为500 000。另一种常见的促进剂是---peg，peg分子量小6000～8000、粘度低、价格低廉，但它不能完成取代---葡聚糖。在某些条件下5%～10%---葡聚糖效果较好，若用5%～10%peg则可产生---的本底。因此，使用促进剂时有---优化条件。

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