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microrna芯片:

rna干扰(rna interference, rnai)现象是一种进化上保守的抵御或外来---qin犯的防御机制。将含有靶基因mrna同源互补序列的rnadouble strand rna， dsrna导入细胞后，能够特异地识别该mrna，引起mrna的降解，从而导致相应的功能缺失。3-94《---------食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》(二)原商检局制订的行业标准，等效采用美国fda的标准方法，用于对出口食品中的大肠进行检测。rnai提供了一种经济、快捷、gao效的抑制特异基因表达的技术手段,该技术已被广泛用于研究基因功能和chuan染性---及恶xingzhong瘤基因zhi疗领域。目前常用的rna干扰手段为mirna、 shrna和sirna等。

mirna是一类可以通过rnai机制调节基因表达的内源性小rna，人工mirna与shrna的设计原理基本相同，由于mirna具有内源性，因此其更易产生有效的基因沉默。

技术流程：

dsrna或pre-mirna被导入细胞后，能够被一种特异的---内切酶dicer识别并切割成为小片段，这些片段在rna解旋酶的作用下解链。继之反义链在与体内一些酶包括内切酶、外切酶、解旋酶等结合形成rna---的沉默复合物rna-induced silencing complex，risc，risc与mrna同源区进行特---结合，若mirna与mrna的结合位点配对，则切割mrna；若mirna与mrna的结合位点不配对，则抑制mrna的翻译。蛋白质定量组学服务细胞内蛋白质组丰度的动态变化对不同生命过程有重要影响。

活性氧检测试剂盒reactive oxygen species assay kit是一种利用荧光探针dcfh-da进行活性氧检测的试剂盒。dcfh-da本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成dcfh。而dcfh不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的dcfh生成有荧光的dcf。逆转录---载体在外源基因表达、基因沉默、、生物制药等得到广泛的应用。检测dcf的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。 本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂rosup以便于活性氧的检测。rosup是一种混合物compound mixture，浓度为50mg/ml。

一、注意事项

1、探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

2、探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否---。

3、尽量缩短探针装载后到测定所用的时间---时间除外，以减少各种可能的误差。

4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴---手套操作。

二、操作步骤：

1. 所有在纯化系统里使用的溶液当日都需要经过 0.22μm 的滤膜抽滤、脱气处理；保存 4℃ 冰箱里的缓冲液若要在室温使用需恢复至室温后抽滤脱气；

2. 样品上柱纯化前，需先滤膜过滤，少量样品可用离心13000rpm，10min；

3. 依次用水、缓冲液洗泵；设置流速和柱前警报压压力值参阅层析柱及填料说明书，取较小的一个大耐受压力。防止柱中进入气泡，影响分离效果；

4. 当柱子限压在 0.3mpa，或者在限压状态---速很低时，ph valve 中的 restirtor 可以切换成 off line，即显示 by-pass 状态；

5. 当需要通过仪器上样环上样时，将 w1 阀口处换成带透明短软管的阀门，从此处阀门位通过倒吸样品上样；

6. 进样阀「inject」为上样状态。上样结束可将进样阀切换回「load」状态。并用纯水认真清洗上样环至少 3 次；将 w1 阀口处换回原来接头阀门。

7. 纯化结束后，用纯水清洗泵和平衡柱子；再用 20% 的---清洗泵以及系统。长期不用，层析柱应保存在 20% 的---中，泵放置在 20% ---中；

8. 实验结束后及时倾倒废液瓶里的废液；