植物组织原位杂交电话「多图」
原位杂交是指;分子杂交的一种形式。由未经抽---离的染色体dna,在原来位置上被变性成单链后,与探针进行分子杂交。1977年由本顿(w.d.benton)和戴维斯(r.w.davis)在原分子杂交基础上发展的一种较新的分子杂交技术。方法是将菌落或噬菌斑转移到硝9酸纤维素滤膜上,使在原位发生溶菌后变性的dna,同滤膜原位结合,再与有放5射性同位素标记的特定核苷酸“探针”杂交,其结果可用放5射自显影来显示,出现银粒的地方便是待测染色体dna上与探针互补顺序所在的位置。对快速检测转化群落中的dna序列或任何一种插入的dna序列,以及动植物的基因定位工作,都具有广泛应用价值。(见“分子杂交”、“放5射自显影”、“影印培养技术”)
原位杂交技术可应用于什么方面
1.细胞特---mrna转录的定位 可用于基因图谱、基因表达和基因组进化的研究。
2.感6染组织中---dna/rna的检测和定位,如eb---mrna、人类乳3头状瘤---和巨细胞---dna的检测。
3.癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测。
4.基因在染色体上的定位。
5.检测染色体的变化,如染色体数量异常和染色体易位等。
6.分裂间期细胞遗传学的研究,如遗传病的产前诊断和某些遗传
就dna探针和rna探针的比较,dna探针在杂交过程中会出现探针双链之间退火的可能,也更倾向于在溶液中形成大分子的探针聚合体,从而影响其渗透能力。而rna 探针的应用,将提高dna-rna杂交子的热稳定性。
tips:rna探针因其单链、高分子结合力、可适应高温杂交的特性,其检测特---和灵敏度均优于dna探针。常用的rna探针标记方法为构建质粒后进行转率合成。通过pcr扩增的方法,可以更方便地进行rna探针的制备;rna探针合成后,还需验证其对目标片段检测的灵敏度和特---。
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