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选择素elisa试剂盒的实验原理

选择素elisa试剂盒是一类异亲型结合、ca2+依赖的细胞粘着分子，能与特异糖基识别并结合。主要参与白细胞与血管内皮细胞之间的识别与粘着。

实验原理：

将目标包被于96孔微孔板中，制成固相载体，向微孔中分别加入品或标本，其中的目标连接于固相载体上的结合，然后加入微生物化的目标，将未结合的生物素洗净后，加入hrp标记和亲和素，再次洗涤后加入tmb底物显色。tmb在---化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的。颜色的深浅和样品中的目标呈正相关。用酶1标仪在450nm波长下测定吸光度o.d.值，计算样品浓度。

精密度：精密度用样品测定值的变异系数cv表示。cv%=sd/mean×100

批内差：取同批次选择素elisa试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测，每份样本连续测定20次，分别计算不同浓度样本的平均值及sd值。

批间差：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及sd值。

批内差： cv<10% inter-批间差： cv<13%

经测定，试剂盒在x期内按温度保存，其活性率小于5%。为减小外部因素对试剂盒前后检测值的影响，实验室的条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可人为误差。

选择素elisa试剂盒识别的配体都是一些寡糖基团，迄今为止发现的配体都是一些具有唾液酸化路易斯寡糖(s-le，siaglyl-lewis)或类似结构的分子。一种寡糖基团可以存在多种糖蛋白和糖脂分子上，并分布于多种细胞表面，因此选择素分子配体在体内分布较为广泛。

甘油三酯tg检测试剂盒比色法，#ktb2200：用---1醇抽提取tg，koh皂化tg后水解生成甘油及脂肪酸，periodic acid氧化甘油生成甲醛，在氯离子存在下甲醛与acetylacetone缩合生成黄色物质，在420 nm有特征吸收峰，其颜色的深浅与tg含量成正比。该试剂盒提供了一种简单的检测方法检测动物组织、细胞、serum浆以及植物样本中甘油三酯tg的含量水平；而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。

游离胆固醇fc检测试剂盒比色法，#ktb2210：胆固醇氧化酶催化游离胆固醇fc生成△4-胆甾烯酮和h2o2，---化物酶催化h2o2、4----安替比林和酚生成红色醌类化合物，在500 nm有吸收峰，其颜色深浅与fc含量成正比。该试剂盒提供了一种简单的检测方法检测生物样本如动物组织、细胞---、serum浆中游离胆固醇fc的含量水平；而且细致优化了样本处理方法、实验操作流程以及结果计算过程。

核糖---缩写为rna，即ribonucleic acid，存在于生物细胞以及部分---、类---中的遗传信息载体。rna由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸，核糖和碱基构成。rna的碱基主要有4种，即a腺piao呤、g鸟piao呤、c胞c4h4n2)、u(尿c4h4n2)，其中，u尿c4h4n2取代了dna中的t。核糖---在体内的作用主要是引导蛋白质的合成。

人体一个细胞含rna约10pg含dna约7pg。与dna相比，rna种类繁多，分子量较小，含量变化大。rna可根据结构和功能的不同分为信使rna和非编码rna。非编码rna分为非编码大rna和非编码小rna。非编码大rna包括核糖体rna、长链非编码rna。非编码小rna包括转移rna、核酶、小分子rna等。小分子rna20~300nt包括 mirna、 sirna、 pirna、scrna、 snrna、 snorna等，---也有小分子rna50~500nt。

回收产物的检测

1.紫外分光光度计法检测dna在od260处有明显吸收峰，当od260=1时，相当于大约50 ng/μl双链dna、40 ng/μl单链dna。od260/od280≈1.6~1.9时，说明dna纯度较高。若洗脱时不用洗脱缓冲液，而是用去离子水，会使比值偏低，因为离子的存在会影响吸光度。但不表示纯度低。

2.sybr法检测取回收产物1 μl，与1 μl sybr染料混匀，于荧光透1视仪下观察是否有黄绿色荧光。

3.琼脂糖凝胶电泳法检测取回收产物5 μl，与10×loading buffer混匀，dna marker加5 μl，电泳后凝胶成像观察。5 μl dna marker相当于每个条带50 ng dna，观察目的条带亮度大致为marker的两倍，则大致估算其浓度约为20 ng/μl。